(21)--55聚酰胺色谱法在黄酮类化合物分离中应用.pptVIP

聚酰胺色谱法在黄酮类化合物分离中应用 聚酰胺分子中既有亲水基团又有亲脂基团，当用极性溶剂（如含水溶剂）作为流动相时，聚酰胺中的烷基作为非极性固定相，其色谱行为类似于反相分配色谱，因黄酮苷的极性大于苷元，所以黄酮苷比苷元容易洗脱； 当用非极性流动相（如氯仿—甲醇）时，聚酰胺则作为极性固定相，其色谱行为类似于正相分配色谱。黄酮苷元的极性小于黄酮苷，因而黄酮苷元易被洗脱。 此即是聚酰胺色谱的双重层析原理。 对分离黄酮类化合物来说，聚酰胺是较为理想的吸附剂。其吸附强度主要取决于黄酮类化合物分子中羟基的数目与位置及溶剂与黄酮类化合物或与聚酰胺之间形成氢键缔合能力的大小。 聚酰胺柱层析可用于分离各种类型的黄酮类化合物，包括苷及苷元、查耳酮与二氢黄酮等。 吸附解吸附 (1) 吸附的关键是化合物酚羟基（或羰基）与聚酰胺的羰基（或胺基H）形成氢键（2）解吸附是由溶剂竞争形成氢键而取代酚羟基与聚酰胺间形成的氢键所致，可能有两种方式： a. 溶剂与聚酰胺形成新氢键 b. 溶剂与酚羟基形成氢键而破坏原有氢键 （3）化合物与聚酰胺形成的氢键能力越强，吸附越强，越难洗脱，反之则越易洗脱 即：吸附力小，先洗脱；吸附力大，后洗脱。 黄酮类化合物从聚酰胺柱上洗脱时有下列规律（1）（2） 母核上增加羟基，洗脱速度减缓。 若以含水移动相（如甲醇-水）作洗脱剂，黄酮苷比游离黄酮先洗脱下来，且洗脱的先后顺序一般是：叁糖苷＞双糖苷＞单糖苷＞游离黄酮； 若以有机溶剂（如氯仿-甲醇）作洗脱剂，结果则相反，游离黄酮比苷先洗脱下来。 不同类型黄酮化合物，先后流出顺序一般是：异黄酮二氢黄酮醇黄酮黄酮醇分子中芳香核、共轭双键多者则吸附力强，所以查耳酮往往比相应的二氢黄酮难于洗脱。（3）（4） 聚酰胺对处于C4羰基邻位的羟基（即3-或5-位）的吸附力小于处于其它位置的羟基； 具有邻二酚羟基的黄酮的吸附力小于具有间二酚羟基或对二酚羟基的黄酮。（5） 洗脱溶剂的影响 聚酰胺与各类化合物在水中形成氢键的能力最强，在有机溶剂中较弱，在碱性溶剂中最弱。 因此，各种溶剂在聚酰胺柱上的洗脱能力由弱至强的顺序为：水＜甲醇或乙醇（浓度由低到高）＜丙酮＜稀氢氧化钠水溶液或氨水＜甲酰胺＜二甲基甲酰胺（DMF）＜尿素水溶液。（6） 练习A、R1＝R2＝H C、R1＝Glc, R2＝HB、R1＝H, R2＝Rha D、R1＝Glc, R2＝Rha聚酰胺柱色谱（条件60%甲醇—水洗脱） 洗脱由先至后( )＞( )＞( )＞( ) 答案：（D）＞（B）＞ （C）＞（A）原因：D的酚OH数目最少，最先被洗脱； A的酚OH数目最多，最后被洗脱； B和C的酚OH数目一样，但位置不同； B在3位，形成分子内氢键，吸附力小，先被洗脱； C在7位，未形成分子内氢键，吸附力大，后被洗脱。 总结总黄酮溶于 ，拌样上聚酰胺（ 为溶剂装柱）依次用水，稀-浓 洗脱苷（苷元相同）水10%醇20%醇30%醇50%醇70%醇75%醇95%醇杂质稀乙醇苷，苷元交叉区苷元三糖苷双糖苷单糖苷异黄酮二氢黄酮黄酮黄酮醇