食品生物化学实验指导 课件 第二章 糖类 实验一 糖的颜色反应和还原性的鉴定.pptx

实验一 糖的颜色反应和还原性的鉴定 一、实验目的1. 掌握某些糖的颜色反应原理，学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。2. 学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及原理。 二、实验原理1. 颜色反应（1）α-萘酚反应（Molisch反应）糖在浓无机酸（硫酸．盐酸）作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚生成紫红色物质。因糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性，故此反应不是糖类的特异反应。 （2）间苯二酚反应（Seliwanoff反应）在酸作用下，酮糖脱水生成羟甲基糠醛，后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应，醛糖在同样条件下呈色反应缓慢。只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时，才呈微弱的阳性反应。在实验条件下，蔗糖有可能水解而呈阳性反应。 二、实验原理2. 还原反应福林试剂和班氏试剂均为含Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，其本身被还原成红色或黄色的Cu2O，此法常用做还原糖的定性或定量测定。 三、实验试剂与器材1. 材料：棉花或滤纸。2. 试剂：浓硫酸、10g / L蔗糖溶液、10g / L葡萄糖溶液、10g / L淀粉溶液、10g / L果糖溶液、10g / L麦芽糖溶液、蒸馏水。（1）莫氏试剂（50g / Lα-萘酚的酒精溶液）：称取α-萘酚5g，溶于95％酒精中，总体积达100mL，贮于棕色瓶内，用前配置。（2）塞氏试剂（0.5g / L间苯二酚一盐酸溶液）：称取间苯二酚0.05g溶于30mL浓盐酸中，再用蒸馏水稀释至100mL。 三、实验试剂与器材（3）福林试剂：甲液（硫酸铜溶液）：称取34. 5g CuSO4（CuSO4·5H2O ）溶于500mL蒸馏水中。乙液（碱性酒石酸盐溶液）：称取125g NaOH和137g酒石酸钾钠溶于500mL蒸馏水中。 三、实验试剂与器材（4）班氏试剂：称取柠檬酸钠173g及无水碳酸钠100g加人600mL蒸馏水馏水中，加热使其溶解，冷却，稀释至850mL。另称取1.47g 无水硫酸铜溶解于100mL热蒸馏水中，冷却后稀释至150mL。最后，将硫酸铜溶液徐徐加入柠檬酸钠-碳酸钠溶液中，边加边搅拌，混匀，如有沉淀，过滤后贮存于试剂瓶中可长期使用。3. 仪器水浴锅、试管、试管架、试管夹、滴管、电炉。 四、实验步骤1. 颜色反应（1）α-萘酚反应取5支试管对应做好标记，分别加入10g / L葡萄糖溶液、10g / L果糖溶液、10g / L蔗糖溶液、10g / L淀粉溶液各1mL和少量纤维素（滤纸或棉花浸于1mL水中），然后各加入莫氏试剂2滴，勿使试剂接触试管壁，摇匀后将试管倾斜，沿试管壁慢慢加入1.5mL浓硫酸（切勿振摇），慢慢直起试管。浓硫酸在试液下形成两层。观察硫酸与糖溶液的液面交界处，有无紫红色环出现。 四、实验步骤1. 颜色反应（2）间苯二酚反应取3支试管，分别加入10g / L葡萄糖溶液、10g / L果糖溶液、10g / L蔗糖溶液各0.5mL。再向各试管分别加入塞氏试剂5mL，混匀。将3支试管同时放入沸水浴中，注意观察，记录各试管颜色的变化及变化对间。 四、实验步骤2. 还原反应（1）于5支试管中分别加入福林试剂A和B各1mL，混匀后，分别加入10g / L葡萄糖溶液、10g / L蔗糖溶液、10g / L果糖溶液、10g / L麦芽糖溶液和10g / L淀粉溶液各1mL，置沸水浴中加热数分钟，取出，观察各试管的变化。（2）另取5支试管，分别加入10g / L葡萄糖溶液、10g / L蔗糖溶液、10g / L果糖溶液、10g / L麦芽糖溶液和10g / L淀粉溶液各1mL，然后每支试管加班氏试剂2mL，置沸水浴中加热数分钟，取出，冷却，和上面结果比较。 五、实验结果与分析 六、思考题1. 观察每支试管中物质反应结果是否存在差异？为什么？2. 测定还原糖的方法有哪些，原理上有何不同? THANKS谢谢