食品生物化学实验指导 课件 第二章 糖类 实验四 淀粉含量测定.pptx

实验四 淀粉含量测定 一、实验目的1. 明确与掌握各类食品中淀粉含量的原理及测定方法。2. 掌握用酶水解法和酸水解法测定淀粉的方法。 二、实验原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 三、实验试剂与器材1.试剂乙醚、85％乙醇、200g/L氢氧化钠溶液、甲基红指示液、5g/L淀粉酶溶液、碘溶液、6mol/L盐酸、碱性酒石酸铜甲液、碱性酒石酸铜乙液、葡萄糖标准溶液。甲基红指示液（2g/L）：称取甲基红0.2g，用少量乙醇溶解后，定容至100mL。5g/L淀粉酶溶液：称取淀粉酶0.5克，加100毫升水溶解，数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中或现配现用。碘溶液：称取3.6克碘化钾溶于20毫升水中，加入1.3克碘，溶解后加水稀释至100毫升。6mol/L盐酸：量取50毫升盐酸加水稀释至100毫升。 三、实验试剂与器材碱性酒石酸铜甲液：称取15.00g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于水并定容到1000mL。碱性酒石酸铜乙液：称取50.00g酒石酸钾钠与75.00g氢氧化钠，加适量水溶解，现加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水定容至1000mL。贮存于橡胶塞玻璃瓶内。葡萄糖标准溶液：准确称取1.0000g经过98~100℃干燥2h的葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水定容至1000mL。此溶液每毫升相当于1.0mg葡萄糖。2.器材水浴锅、滴定管等。 四、实验步骤1. 样品处理称取2-5g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50mL乙醚分5次洗除脂肪，再用约100mL 85％乙醇洗去可溶性糖类，将残留物移入250mL烧杯内，并用50mL水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15min，使淀粉糊化，放冷至60℃以下，加20mL淀粉酶溶液，在55℃～60℃保温1h，并时时搅拌。然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不显现蓝色，若显蓝色，再加热糊化并加20mL淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。 四、实验步骤加热至沸，冷后移入250mL容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。取50mL滤液，置于250mL锥形瓶中，并加水至刻度，沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示液，用200g/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100mL容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并人100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。 四、实验步骤2.测定（1）标定标定碱性酒石酸铜溶液吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL碱性酒石酸乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠两粒，从滴定管加约9mL葡萄糖，控制在2min内加热至沸，趁沸以每秒一滴的速度继续滴加葡萄糖，直到溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积，同时做三份平行，取其平均值，计算每10mL（甲液、乙液各5mL）碱性洒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量。 注意：也可按上述方法标定4~20mL碱性酒石酸铜溶液（甲液、乙液各半）来适应试样中还原糖的浓度变化。 四、实验步骤（2）试样溶液预测吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL碱性酒石酸乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠两粒，控制在2min内加热至沸，保持沸腾以先快后慢的速度从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾，待溶液颜色变浅时，以每秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪占为终点，记录样液消耗体积。当样液中还原糖浓度过高时，应适当稀释后再进行正式测定，使每次滴定消耗样液的体积控制在与标定碱性酒石酸铜溶液时所消耗的还原糖标准溶液的体积相近，在10mL左右。 四、实验步骤（3）试样溶液测定吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL碱性酒石酸乙液，置于150mL锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠两粒，从滴定管滴加比预测体积少1mL的试样溶液至锥形瓶中，使在2min内加热至沸，保持沸腾。以每秒一滴的速度滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样液消耗体积，同法平行操作三份，得出平均消耗体积。同时量取50mL永及与试样处理时相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做空白试验。 五、实验结果与分析 式中 X1——样品中淀粉的含量，％； A1——测定用样品中还原糖的含量，mg； A2——试剂空白中还原糖的含量，mg； 0.9——还原糖（以葡萄糖计）换算成淀粉的换算系数； m1——称取样品质量，g； V1——测定用样品处理液的体积，mL。 计算结果保留小数点后一位。 六、思考题1. 影响淀粉含量测定的因素有哪些？2. 测定淀粉含量的方法及原理有哪些？ THANKS谢谢