农业农村部公告第197号-3-2019CN.docx

ICS 65.120 B 46 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第197号一3—2019 饲料中硫酸新霉素的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of neomycin sulfate in feeds— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2019-08-01 发布 2020-01-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 农业农村部公告第197号—3—2019 前 言 本标准按照GB/T1.1—2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出， 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC 76)归口 本标准起草单位：四川省饲料工作总站[农业农村部饲料质量监督检验测试中心(成都)]。 本标准主要起草人：张静、岳琴、赵立军、魏敏、王宇萍、林顺全、程传民。 工 1 农业农村部公告第197号—3-2019 饲料中硫酸新霉素的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中硫酸新霉素含量测定的液相色谱-串联质谱法。 本标准适用于配合饲料、精料补充料中硫酸新霉素的测定。 本标准的检出限为0.2 mg/kg, 定量限为0.4 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14669.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中硫酸新霉素用磷酸盐缓冲液提取后，经 Cis固相萃取柱净化，供液相色谱-串联质谱仪测定，外 标法定量。 4 试剂或材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯。 4.1 水：符合GB/T 6682 中的一级水的规定。 4.2 硫酸新霉素对照品：纯度大于90.0%。 4.3 甲醇：色谱纯。 4.4 乙腈：色谱纯。 4.5 盐酸溶液：取盐酸9 mL, 加水至100 mL, 混匀。 4.6 磷酸盐缓冲液(含0.15g/L 乙二胺四乙酸二钠和20g/L 三氯乙酸溶液):准确称取磷酸二氢钾1.36 g,用980mL 水溶解，用盐酸溶液(4.5)调pH 至4.0,分别加入乙二胺四乙酸二钠0.15 g 和三氯乙酸20 g,溶解混匀并定容至1000 mL。 4.7 七氟丁酸溶液(13mL/L): 准确量取13mL 七氟丁酸，用水稀释至1000 mL,2℃~8℃ 避光保存，有 效期为6个月。 4.8 七氟丁酸溶液(2.6 mL/L): 准确量取七氟丁酸溶液(13 mL/L)(4.7)50mL, 用水稀释至250 mL, 2℃~8℃避光保存，有效期为6个月。 4.9 洗脱液：准确量取甲醇(4.3)70mL、 氨水10mL、 七氟丁酸溶液(2.6 mL/L)(4.8)20mL, 混匀。 4.10 标准储备溶液：准确称取硫酸新霉素对照品(4.2)50 mg 于50 mL 容量瓶中，用水溶解并定容，配 制成浓度为1.0 mg/mL 的标准储备溶液，2℃~8℃保存，有效期为3个月。 4.11 标准中间溶液：准确吸取标准储备溶液(4.10)1mL 于100mL 容量瓶中，用水稀释并定容，配制成 浓度为10μg/mL 的标准中间溶液，2℃~8℃保存，有效期为1个月。 4.12 标准工作溶液：准确吸取标准中间溶液(4.11)适量，用空白样品基质配制成不同浓度系列的标准工 作溶液。临用现配。 4.13 固相萃取柱：Cis固相萃取柱(500 mg/3mL), 或性能相当者。 2 农业农村部公告第197号—3—2019 4.14 0.22μm 有机滤膜。 5 仪器设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪(配电喷雾离子源)。 5.2 分析天平：感量0.01 mg。 5.3 天平：感量0.001 g. 5.4 离心机：转速为8000 r/min 以上。 5.5 超纯水器 5.6 涡旋混合器。 5.7 振荡器。 5.8 固相萃取装置。 5.9 氮吹仪。 6 样品 按照GB/T14669.1 的规定，抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取样。按 GB/T 20195 的规定 制备，粉碎后过0.42mm 孔筛，混匀，装入密闭容器中备用。 7 试验步骤 7.1 提取 平行做2份试验，准确称取试样2g(精确到0.01 g)于50mL 离心管中，准确加入20mL 磷酸盐缓冲 液(4.6),振荡提取20 min,以8000r/min离心5min,准