农业农村部公告第197号-4-2019CN.docx

ICS 65.120 B 46 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 农业农村部公告第197号一4—2019 饲料中海南霉素的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of hainanmycin in feeds— Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2019-08-01 发布 2020-01-01 实施 中华人民共和国农业农村部发布 I 农业农村部公告第197 号 — 4 2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76) 归口。 本标准起草单位：中国农业大学动物医学院。 本标准主要起草人：沈建忠、程林丽、温凯、吴聪明、汤树生、武英豪、陈可心。 1 农业农村部公告第197号—4—2019 饲料中海南霉素的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中海南霉素含量测定的液相色谱-串联质谱方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料和添加剂预混合饲料中海南霉素含量的测定。 本方法海南霉素的检出限为0.02 mg/kg, 定量限为0.05 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中的海南霉素用有机溶剂提取，蒸干转溶后经多次液液分配净化，用液相色谱-串联质谱法测定， 基质匹配标准曲线校准，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 水：GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 甲酸：色谱纯。 4.5 正己烷. 4.6 醋酸铵(色谱纯)。 4.7 乙酸乙酯：色谱纯。 4.8 20%甲醇溶液：取甲醇200 mL, 加水定容至1000mL, 混匀。 4.9 90%甲醇溶液：取甲醇900 mL, 加水定容至1000 mL, 混匀，加入正己烷，混和，形成正已烷饱和的 甲醇溶液。 4.10 1mmol/L 醋酸铵溶液：取0.0385g 醋酸铵(4.6),加水定容至500 mL, 混匀。 4.11 20%乙腈溶液：取乙腈200mL, 加水定容至1000mL, 混匀。 4.12 海南霉素标准储备溶液(1000μg/mL): 准确称取10.0mg 的海南霉素(纯度≥97%)于10 mL 容 量瓶中，用乙腈(4.3)溶解定容，配成1000μg/mL 的标准储备液。 -20℃下保存，有效期为12个月。 4.13 海南霉素标准中间溶液I(100μg/mL): 准确量取适量海南霉素标准储备溶液(4.12)于容量瓶中， 用乙腈(4.3)稀释定容。 -20℃下保存，有效期为6个月。 4.14 海南霉素标准工作溶液(10μg/mL): 准确量取适量标准中间溶液I(4.13) 于容量瓶中，用乙腈 (4.3)稀释定容。 一20℃下保存，有效期为6个月。 4.15 0.22μm 有机滤膜。 5 仪器设备 5.1 液相色谱-串联质谱仪(LC-MS/MS): 配有电喷雾电离源。 2 农业农村部公告第197号—4—2019 5.2 分析天平：感量0.001g 和感量0.01 mg。 5.3 振荡仪。 5.4 离心机：转速不低于8000 r/min。 5.5 涡旋混匀器。 5.6 氮吹仪 6 样品 按照 GB/T 20195的规定制备样品，粉碎后过0.42 mm 孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中，备用。 7 试验步骤 7.1 提取 平行做2份试验。称取试样2g(精确到0.001g)于50 mL 离心管中，准确加入10 mL 乙酸乙酯振荡 提取30 min,8000 r/min下离心10min,转移上清液至另一离心管中。残渣中准确加10mL 乙酸乙酯重 复提取1次，合并2次上清液，准确取1mL 直接于40℃旋转蒸发至近干，准确各加20%甲醇溶液(4.8) 2.0 mL复溶，为提取复溶液。 7.2 净化 于提取复溶液(7.1)中加3mL 正己烷，涡旋2 min,8000 r/min离 心 5 min。 收集上层正己烷，下层 溶液中再加2mL 正已烷重复萃取1次，弃去下层溶液，合并正己烷层。加20%甲醇溶液(4.