兽医微生物学课件-细菌的遗传变异.pptVIP

原生质体融合的主要步骤 选择亲株 → →制备原生质体→→原生质体融合 → →原生质体 再生 → → 筛选优良性状的融合重组子 三、细菌遗传变异的实际意义 诱变育种 在疾病的诊断、治疗与预防中的应用 在测定致癌物质中的应用 在流行病学中的应用 在基因工程中的应用 诱变育种：是用物理或化学的诱变剂使诱变对象内的遗传物质（DNA）的分子结构发生改变，引起性状变异并通过筛选获得符合要求的变异菌株的一种育种方法。 诱变育种具有极其重要的实践意义。当前发酵工业和其他微生物生产部门所使用的高产菌株，几乎毫无例外地都是通过诱变育种而明显提高其生产性能的。 1. 诱变育种 诱变育种的基本过程 选择选择合适的出发菌株 ↓ 制备待处理的菌悬液 ↓ 诱变处理 ↓ 筛选 ↓ 保藏和扩大试验 1.出发菌株的选择出发菌株———用来育种处理的起始菌株◆出发菌株应具备： ①对诱变剂的敏感性高；  ②具有特定生产性状的能力或潜力； ◆出发菌株的来源； ①自然界直接分离到的野生型菌株： ②历经生产考验的菌株： ③已经历多次育种处理的菌株： 2.制备细胞悬液要求： ①菌体处于对数生长期，并使细胞处于同步生长； ②细胞分散且为单细胞，以避免表型迟延现象（phenotypic lag）;方法： ①玻璃珠打散10-15min;  ②加０.3%吐温80（表面活性剂）  ③用无菌脱脂棉过滤。 制备：  物理诱变剂——生理盐水（0.85%NaCl)  化学诱变剂——缓冲液 浓度：  细菌、放线菌 108个/ml  霉菌、酵母菌 106个/ml 表型迟延现象:指某一突变在DNA复制和细胞分裂后，才在表型上显示出来，造成不纯的菌落。 3.诱变处理 诱变剂的作用： ①提高突变的频率 ②扩大产量变异的幅度 ③使产量变异朝着正突变或负突变移动 剂量的表示法：不同种类和不同生长阶段的微生物对诱变剂的敏感程度不同，所以在诱变处理前，一般应预先作诱变剂用量对菌体死亡数量的致死曲线，选择合适的处理剂量。—致死率是最好的诱变剂相对剂量的表示方法。 最适剂量的选择：产量性状的育种中多倾向于低剂量（致死率的70～80%） 诱变处理方式： 单一因子处理： 复合因子处理： 先后使用 同时使用 单一因子重复使用 两种以上因素 2.在疾病的诊断、治疗与预防中的应用 形态、结构、染色性、生化特性、抗原性及毒力等方面的变异，使得诊断复杂化 耐药菌株日益增多，因此以药敏实验为指导 减毒菌株和无毒株可制备成疫苗 3.在测定致癌物质中的应用 凡能诱导细菌发生突变的物质都有可能是致癌物质。 1.碱基置换（substitution） 定义：对DNA来说，碱基的置换属于一种染色体的微小损伤（microlesion），一般也称点突变（point mutation）。它只涉及一对碱基被另一对碱基所置换。 分类：转换（transition），即DNA链中的一个嘌呤被另一个嘌呤或是一个嘧啶被另一个嘧啶所置换； 颠换（transversion），即一个嘌呤被一个嘧啶,或是一个嘧啶被一个嘌呤所置换。 对某一具体诱变剂来说，即可同时引起转换与颠换，也可只具其中的一种功能。 亚硝酸可以使碱基发生氧化脱氨作用 HNO2 胞嘧啶（C） 尿嘧啶（U） HNO2 腺嘌呤（A） 次黄嘌呤（H） HNO2 鸟嘌呤（G） 黄嘌呤（X） 这些反应及形成物均可在DNA复制中产生影响，主要是使碱基对发生转换。 碱基转换的分子机制——以亚硝酸为例 若干诱变剂的作用机制及诱变功能 诱变因素 在DNA上的初级效应 遗传效应 碱基类似物 掺入作用 AT=GC双向转换 羟 胺 与胞嘧啶起反应 GC→AT的转换 亚硝酸 A、G、C的氧化脱氨作用 交 联 AT=GC双向转换 缺失 烷化剂 烷化碱基（主要是G） 烷化磷酸基团 丧失烷化的嘌呤 糖-磷酸骨架的断裂 AT=GC双向转换 AT→TA的颠换 GC→CG的颠换 巨大损伤（缺失、重复、倒位、易位） 丫啶类 碱基之间相互作用 双链变形