兽医微生物学课件-病毒学各论.pptVIP

黄病毒的致病性 黄病毒通过昆虫叮咬传染给人和动物，先在局部繁殖，然后到淋巴结，再通过淋巴和血流扩散到全身，包括靶器官，整个过程与披膜病毒相似。 第二节 猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus) 1833年首先发现于美国的俄亥俄州。 1903年， Schweinitz Dorset 证明猪瘟的病原体是病毒。 1908年匈牙利的 Hutyra Koves 于制成猪瘟高免血清。 1909年日本第一次发现并开始研究猪瘟。 我国何时发现和证明猪瘟存在，没有明确的文字记载。 1925年，东南大学农科开始 研制免疫血清防制猪瘟。 猪瘟遍布于全世界，具有高度接触传染性。由于各国的诊断和防制比较 认真，许多国家和地区已先后宣布消灭了猪瘟。根据 1976 年巴黎国际兽疫局 的资料，已宣布无猪瘟的国家有阿尔巴尼亚（1973）、保加利亚（1975）、丹麦（1933）、芬兰（1971）、英国（1971）、匈牙利（1971）、冰岛（1953）、卢森堡、挪威（1963）、瑞典（1944）、瑞士（1974）、南斯拉夫（1973）。日本自 1975年以来没有猪瘟病例，但在1980年又有许多处暴发。美国也已宣布于1978年无猪瘟病例发生 。  图. 猪瘟病毒-超薄切片（箭头所指为病毒粒子） 一、基本特性 病毒核酸：为单股正链RNA．其核心外面披有一脂蛋白的囊膜，完整病毒颗粒呈球形，直径约40-50nm。中心有二十面体对称的核衣壳．直径为29nm。囊膜表面伸展出许多长6-8nm含糖蛋白的纤突结构。  基因组为单股正链RNA，长约l2.3kb，由5’非翻译区(5’-UTR)、一个开放阅读框(0RF)和3’-非翻译区(３’-UTR)构成。 所有结构蛋白和非结构蛋白均由ORF所编码。并且ORF编码一种约3898个氨基酸的多聚蛋白, 加工成12种成熟的病毒蛋白。 从N端到C端的顺序依次为：Npro、C、Ems/E0、El、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B、XS5A和NS5B。 二、基因组结构与功能  CSFV基因组结构与功能图 非编码区 编码区—ORF 3’-UTR 5’-UTR 非结构蛋白 结构蛋白 E1 Ｅms C E2 Npro P7 NS2-3 NS5B  其中Npro、C、Ems/E0、El、E2、P7、NS2对于CSFV的RNA的复制是必不可少的，目前已定位的CSFV蛋白有5种，Npro、C、Ems/E0、El、E2，它们均由CSFV的5’端所编码。 ＣＳＦＶ的基因组结构模式图 5’ 3’ 169 268 495 690 1063 Npro C E0 El E2 P7 NS2 NS3 NS4A NS4B NS5A NS5B 结构蛋白 　4种结构蛋白：C、Ems/E0、El、E2。 　E0、El和E2的N端分别位于氨基酸残基Glu268、Leu 495和Arg690。蛋白酶首先在核衣壳蛋白C和E012前体之间剪切聚蛋白，随后在E2的C端剪切开、最后E012被迅速剪切成E01和E2。 开放阅读框架（ORF） （1）C ：也称P14，是病毒的衣壳蛋白，由病毒0RF中的 Serl69-Ａla267组成。 （2）Ｅms ：也称gp44/48，旧称EO，是病毒囊膜糖蛋白。 结构： 有9个可能的糖基化位点，去糖基蛋白骨架部分分子量26kD，由227个氨基酸残基组成。 功能： 有Rnase酶活性，可降解病毒和细胞的RNA。 可导致免疫抑制，引起动物的淋巴和上皮细胞凋亡。 与CSFV的宿主嗜性有关，用E0可有效阻断CSFV对易感动物细胞的感染。 E0还表现出神经细胞毒性。 （3）El：也称gp33，CSFV的囊膜糖蛋白，去糖基的蛋白骨架分子量21.8KD，由195个氨基酸残基组成，内有3个可能的N-连接糖基化位点。其蛋白骨架中有2段硫水序列。由于E1埋在病毒囊膜内，所以不能诱导猪产生中和抗体，也不能保护猪抵抗致死量CSFV的攻击。 非翻译区 5’-UTR结构特点 长约373个核苷酸，含有多个密码子和一个核糖体进入位点(IRES)。 5’-UTR的二级结构绝大多数是由A、B、C、D 4个结构域组成，其中结构域D最为复杂，由一系列茎环结构组成，并被实验证明为IRES起始翻译必不可少的元件。 5’端非编码区 图 5’UTR二级结构模型 IRES的5’边界位于核苷酸28-66位之间，这些核苷酸序列形成一个茎环结构(发卡B)，其对于IRES活性可能很重要。 5’端缺乏甲基化的“帽子”结构，序列保守性很高，可形成稳定的二级结构，在基因表达和复制中起重要的调控作用。 5’-UTR功能 5’-UTR是一保守性很强的区域，是研究CSFV系统发生的重要参考序列，并且已是应用RT-PCR技