使用快速三维光谱功能对DNA检测用荧光探针进行荧光测定.pdfVIP

LAAN-A-RF-C001 Application 光吸收分析 Spectrophotometric Analysis News 使用快速三维光谱功能对 DNA 检测用荧光探 No. A490 针进行荧光测定 Three-Dimensional Spectra Measurement of Fluorescent Probes used for DNA Detection 在生命科学领域，荧光素标记的 DNA 探针（以下简称“荧光 探针”）广泛应用于检测和鉴别特定的 DNA。荧光探针会与特定 的 DNA 进行选择性结合，因此可以利用荧光标记检测到特定的 DNA。因为荧光素有多种类型，掌握荧光探针的荧光波长在检测 DNA 时十分重要。 本文向您介绍使用荧光分光光度计 RF-6000 的三维光谱测定 功能，对两种荧光探针进行荧光测定的示例。 仪器、测定方法和结果 Instrument, Measurement Method and Results 图 1 为 RF-6000 的外观图。RF-6000 具有三维光谱测定功能和 自动光谱校正功能，可以在短时间内对较宽的波长范围进行测定。 图 2 荧光探针 A 的三维光谱 Three-Dimensional Spectrum Using Fluorescent Probe A 自动光谱校正功能是指不受仪器影响（不使用仪器函数）自动获 得校正光谱的功能，在测定时可以自动获得正确的荧光光谱以及 激发光谱。 本次分析对使用不同荧光素标记的荧光探针 A 、荧光探针 B 分别进行了三维光谱测定。测试三维光谱时，依次改变激发波长， 并测定荧光光谱，这样就得到了三维光谱。得到的数据中横轴对 应荧光光谱（Em），纵轴对应激发光谱（Ex）。 图 2 为荧光探针 A 的测定结果；图 3 为荧光探针 B 的测定结 果。这些是由校正光谱组成的三维光谱。每个样品的测定时间约 为 3 分钟。如箭头所示，荧光探针 A 主要在①和②处出现荧光峰， 荧光探针 B 主要在①处出现荧光峰。 荧光探针 A （图2）的峰①于 550 nm 处激发，荧光波长约为 600 nm ；峰②于510 nm 处激发，荧光波长约为 530 nm 。荧光探 图 3 荧光探针 B 的三维光谱 Three-Dimensional Spectrum Using Fluorescent Probe B 针 B （图3 ）的峰①是于 550 nm 处激发，荧光波长约为 600 nm 。 表 1 测定条件 Analytical Conditions 仪器 : 荧光分光光度计 RF-6000 光谱类型 : 3D 光谱 测定波长范围 : Ex 400 nm ～ 650 nm, Em 450 nm ～ 700 n