家蚕核型多角体病毒BmNPV泛素基因缺失显著降低病毒增殖效率.docxVIP

微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 2023, 63(7): 2909–2920 /actamicrocn DOI: 10.13343/ki.wsxbResearch Research Article 研究报告 家蚕核型多角体病毒 BmNPV 泛素基因缺失显著 降低病毒增殖效率 许慧鑫，刘芸芸，祁馨宇，唐琦，李国辉* 江苏大学生命科学学院，江苏 镇江 212013 许慧鑫 许慧鑫, 刘芸芸, 祁馨宇, 唐琦, 李国辉. 家蚕核型多角体病毒 BmNPV 泛素基因缺失显著降低病毒增殖效率[J]. 微生物 学报, 2023, 63(7): 2909-2920. XU Huixin, LIU Yunyun, QI Xinyu, TANG Qi, LI Guohui. The absence of ubiquitin gene reduces the proliferation efficiency of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV)[J]. Acta Microbiologica Sinica, 2023, 63(7): 2909-2920. 摘 要： 【目的】泛素是一类进化上高度保守的、由 76 个氨基酸组成的多肽，是蛋白质泛素化 修饰过程中所必需的底物分子， 蛋白质泛素化修饰异常会影响宿主的生长和发育。家蚕核型多角 体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus, BmNPV)基因 orf26 是一个编码病毒泛素的基因，其在 病毒增殖中的具体功能尚不清楚。【方法】本研究利用同源重组的方法将氯霉素(chloramphenicol) 基因(Cm)表达盒替换家蚕杆状病毒泛素基因序列 3′端的 50 个碱基对序列，构建携带 Cm 表达盒的 重组 BmNPV 病毒基因组(Bm-BacmidUb-KO)，利用转座原理将绿色荧光蛋白基因(green fluorescent protein, gfp) 表 达盒插入 Bm-BacmidUb-KO 和野生 型 Bm-BacmidWT 转 座位点， 构建重组 质粒 Bm-BacmidUb-KO-GFP 和 Bm-BacmidWT-GFP ，以及异位互补型的质粒 Bm-BacmidGFP-UbRep 。这些重组病 毒分别转染家蚕卵巢细胞(Bombyx mori ovarian cell，BmN)后， 对转染后的细胞进行绿色荧光观察。 【结果】泛素基因缺失后不影响感染性病毒粒子的产生，但与野生型相比，泛素缺失型重组病毒 明显降低了感染的细胞中产生的绿色荧光数量。免疫印迹分析表明， 泛素缺失后降低重组病毒结构 蛋白 GP64 和 VP39 在细胞中的表达水平， 显著降低病毒增殖效率。生物分析表明，泛素缺失的重 组病毒能延缓家蚕半致死时间 15 h 。【结论】BmNPV 泛素基因缺失不影响感染性病毒粒子的产生， 但显著降低病毒增殖效率。本研究为阐明泛素在 BmNPV 增殖中的具体作用提供了实验依据。 关键词： 家蚕；家蚕核型多角体病毒(BmNPV)；泛素；病毒 资助项目：国家自然科学基金 This work was supported by the National Natural Science Foundation of China . *Corresponding author. Tel: +86-511 E-mail: ghli@ Received: 2022-12-07; Accepted: 2023-02-22; Published online: 2023-02-26 2910 XU Huixin et al. | Acta Microbiologica Sinica, 2023, 63( 7) The absence of ubiquitin gene reduces the proliferation efficiency of Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) * XU Huixin, LIU Yunyun, QI Xinyu, TANG Qi, LI Guohui School