大豆苷元及其衍生物对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响.docxVIP

大豆苷元及其衍生物对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响 这是大豆生长过程中形成的第二层代谢产物。这是大豆的一个重要生理活性物质。 大豆苷元具有抗肿瘤、抗氧化、抗炎等多项功能 虽然大豆苷元具有诸多生物学功效,但是大豆苷元水溶性差,生物利用度低,难以达到理想的效果。因此,以大豆苷元为先导化合物,利用药动团变换原理对其进行修饰,能够从根本上改善其溶解性和代谢稳定性,对于增强其活性具有重要的意义 近年来,大豆苷元的抗肿瘤效应受到广泛关注 本研究探索大豆苷元及其3种苯磺酸酯衍生物的抗肿瘤作用效应,通过分析大豆苷元及其3种衍生物对肿瘤细胞增殖和凋亡的效用,初步确定大豆苷元及其3种苯磺酸酯衍生物的作用浓度和作用时间,探索大豆苷元及苯磺酸酯类衍生物抗肿瘤作用与常见的凋亡通路基因的表达差异,为进一步深入探索大豆苷元抗肿瘤的具体作用机制提供理论参考。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 胎牛血清及胰酶-edta消化液 大豆苷元(陕西慧科植物开发有限公司,纯度98%);DMEM高糖培养基(美国Hyclone公司);胎牛血清(天津灏洋生物制品科技有限公司);0.25%胰酶-EDTA消化液(北京索莱宝科技有限公司);CCK-8试剂盒(江苏凯基生物技术有限公司);红色荧光Tunel细胞凋亡检测试剂盒(江苏凯基生物技术有限公司);PCR试剂盒(北京全式金生物)。 1.1.2 细胞培养和对接 人非小细胞肺癌A549、H1299细胞和肺正常细胞HELF细胞株由武汉大学提供,培养液选择含10%胎牛血清、1%青链霉素的DMEM高糖培养基,培养于含5%CO 1.1.3 仪器 CO 1.2 方法 1.2.1 大豆苷元苯磺酸酯衍生物b 大豆苷元苯磺酸酯衍生物由本实验室合成 本研究利用大豆苷元和3种苯磺酸酯衍生物作为处理因素,分别为大豆苷元苯磺酸酯衍生物A(大豆苷元-4′,7-二苯磺酸酯)、大豆苷元苯磺酸酯衍生物B(大豆苷元-4′-羟基-7-苯磺酸酯)、大豆苷元苯磺酸酯衍生物C(大豆苷元-4′-乙酰氧基-7-苯磺酸酯)(图1)。以下简称为衍生物A (DDA)、衍生物B(DDB)和衍生物C(DDC)。 1.2.2 细胞培养 用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液消化A549、H1299、HELF细胞,用DMEM高糖培养基制备单细胞悬液,以1×10 1.3 测量设计和方法 1.3.1 细胞活力的测定 分别以10 1.3.2 大豆苷元对细胞死亡的影响 收集对数期生长的 1.3.3 细胞培养的养成剂 将3种细胞培养于含10μ 1.3.4 肺癌中的几种 利用 1.4 生存分析方法 应用SPSS 19.0软件进行统计分析,结果以均数[95%CI]表示,多组间比较采用重复测量方差分析、单因素方差分析和q检验,与对照组比较采用Dunnett检验,生存分析采用Kaplan-Meier 和Log-rank 检验法。以 2 结果与分析 2.1 科学家和衍生物对细胞活力的影响 2.1.1 不同浓度的大豆苷元浓度和时间处理对三种细胞的活力有影响 在1×10 2.1.2 不同浓度的诱导和时间处理对三种细胞的活力的影响 衍生物A对HELF的活力促进较强,平均每增加10倍浓度时,活力增强9.15%[4.65,13.65]( 2.1.3 不同浓度的诱导b浓度和时间处理对三种细胞的活力的影响 每增加10倍浓度的衍生物B,HELF细胞的活力增强9.92%[7.49,12.35]( 2.1.4 衍生物b对a549和s1299细胞增力抑制作用的影响 衍生物C浓度平均每增加10倍,HELF细胞活力增强4.82%[4.46,5.19]( 由以上试验结果显示,相比大豆苷元,衍生物B对A549和H1299细胞增力抑制作用更明显。合成的大豆苷元苯磺酸酯衍生物B的水溶性改变后,其仍对肺正常细胞有增殖促进作用、对肺癌细胞有增殖抑制作用。 2.2 大豆苷元苯磺酸酯b活性对三种细胞的克隆和死亡的影响 加入10 μ 2.3 酶b至p53死亡 在衍生物 和 3 衍生物b对细胞凋亡作用的影响 相关研究表明:大豆异黄酮的摄入能够预防乳腺癌、胃癌、结直肠癌的发病 大豆异黄酮能够抑制乳腺癌和结直肠癌的增殖并促进其凋亡 P53凋亡通路与大豆苷元对非小型肺癌细胞和正常肺细胞的抑制增殖活性和促进凋亡作用有关联,其中 综上所述,本项研究发现大豆苷元及其3种衍生物能够降低非小型细胞肺癌细胞A549和H1299细胞的增殖活性,并促进肺正常细胞HELF细胞的增殖活性,衍生物B能够促进肺癌细胞的凋亡和抑制肺正常细胞凋亡。结合TCGA数据库分析,对可能涉及的基因表达进行研究,将为进一步的研究提供理论依据。此项研究中大豆苷元苯磺酸酯衍生物对肺癌细胞的作用虽未达到成药浓度,但是该研究可以对肺癌人群膳食指导以及后期针对大豆苷元的苯磺酸衍生物的保健品开发提供理