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格里斯比色法测定牛乳中掺水量 在过去10年中，中国的奶业快速发展，成为世界第三大产奶国家。但是, 我国奶源基地薄弱致使奶源质量难以保证。而我国目前在原料乳收购环节中主要依赖对原料奶的检测来评判其质量。一些养殖户为了牟利, 经常给牛乳中掺水, 为了保持比重的稳定还要向奶中掺入其他物质, 致使无法用比重法测定牛乳中是否掺水。一般地下水或自来水中都含有一定量的NO 试验应用正交试验设计法, 通过对格里斯干试剂法改良, 用茶多酚代替传统的锌粉, 醋酸代替传统的盐酸, 建立了一种简单、快速、实用的定性检测牛奶中外源水的方法。 1 材料和方法 1.1 试验样本 乳样:纯牛乳购于淮安市快鹿牛奶有限公司;水样:分别采自淮安市、洪泽县、金湖县、盱眙县、涟水县等地。 1.2 试剂及仪器 标准试剂:亚硝酸钠;显色剂:对氨基苯磺酸、α-萘胺、茶多酚、50%醋酸;还原剂:硫酸钡、硫酸锰、锌粉。以上试剂均为分析纯。 721分光光度计:上海光学仪器厂;PH-3c酸度计:上海仪电科学仪器股份有限公司。 1.3 还原剂溶液 还原剂配置:将0.1 g茶多酚、0.2 gα-萘胺及0.6 g对氨基苯磺酸溶解于400 m L 50%的醋酸中, 在棕色瓶中避光保存。取乳样2 m L于25 m L容量瓶中, 加入还原剂0.3 g, 混匀。加入显色剂2 m L, 加水至刻度, 摇匀, 静置3 min后观察颜色, 以试剂空白作参比, 波长544 nm处用石英比色皿于分光光度计测定其吸光度。 1.4 亚硝酸钠标准使用液 取6个25 m L的容量瓶, 分别加入0, 0.2, 0.5, 1.0, 1.5和3.0 m L的5 mg/L亚硝酸钠标准溶液, 其对应的浓度分别为0, 0.04, 0.1, 0.2, 0.3和0.6 mg/L, 按照上述方法进行显色反应, 测定其吸光度。标准曲线如图1所示。 1.5 试验条件的确定 1.5.1 显色时间的确定 取2 m L亚硝酸钠标准溶液, 按照1.3中的方法, 在其他试剂不变的情况下, 分别改变茶多酚、对氨基苯磺酸用量、α-萘胺和显色时间, 测定在不同条件下的吸光度。 1.5.2 正交试验 采用正交试验, 从茶多酚、对氨基苯磺酸用量、α-萘胺和显色时间等四因子上选择最佳试验条件。 1.6 掺水量的确定 给纯牛乳中分别掺入来自淮安市、洪泽县、金湖县、盱眙县和涟水县等地的自来水和井水, 配制成掺水量分别为0, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140和150 mg/L系列的掺水牛乳。按照上述正交试验结果的方法, 分别测定其吸光度, 并记录。 2 结果与分析 2.1 茶多酚的吸光度测定 取2 m L亚硝酸钠标准溶液, 按照1.3中的方法, 加入0.2 gα-萘胺、0.6 g对氨基苯磺酸, 显色时间3 min, 改变茶多酚的量, 测定在不同条件下的吸光度, 见图2。结果表明, 当茶多酚加入量为0.10 g时, 吸光度最大, 故茶多酚的加入量定为0.10 g。 2.2 对氨基苯磺酸溶液的选择 取2 m L亚硝酸钠标准溶液, 按照1.3中的方法, 加入0.10 g茶多酚、0.2 gα-萘胺, 显色时间3 min, 改变对氨基苯磺酸的量, 测定在不同条件下的吸光度, 见图3。结果表明, 当对氨基苯磺酸加入量为0.60 g时, 吸光度最大, 故对氨基苯磺酸的加入量定为0.60 g。 2.3 茶多酚、0.60g对氨基苯磺酸反应物的量的影响 取2 m L亚硝酸钠标准溶液, 按照1.3中的方法, 加入0.10 g茶多酚、0.60 g对氨基苯磺酸, 显色时间3 min, 改变α-萘胺的量, 测定在不同条件下的吸光度, 见图4。结果表明, 当α-萘胺加入量为0.30 g时, 吸光度最大, 故α-萘胺的加入量定为0.30 g。 2.4 显色时间的影响 取2 m L亚硝酸钠标准溶液, 按照1.3中的方法, 加入0.10 g茶多酚、0.60 g对氨基苯磺酸、0.30 gα-萘胺, 改变显色时间, 测定在不同条件下的吸光度, 见图5。结果表明, 当显色时间为4 min时, 吸光度最大, 故显色时间的定为4 min。 2.5 正交试验条件下的试验 表1为L 经对比试验验证:测定亚硝酸盐的最佳因素为A 2.6 不同水量后牛乳颜色的变化 在所采购的纯牛乳中, 分别掺入淮安地区部分市县不同量的当地自来水和井水后的颜色变化情况见表3。 3 格里斯比色法 1) 在试验条件为:茶多酚0.1 g、对氨基苯磺酸0.6g、α-萘胺0.4 g、显色时间4 min时, 其吸光度最大, 显色最明显。 2) 一般地下水或自来水中都含有一定量的NO 试验该进了格里斯比色法, 用茶多酚取代传统的锌粉, 使用更加方便;用醋酸代替了