兰州地区腹泻患儿沙门菌耐药性与分子分型分析.docxVIP

? ? 兰州地区腹泻患儿沙门菌耐药性与分子分型分析 ? ? 申艳琴，董 锟，张 璟，兰 光，张 阳，李欣颖，闫 静，刘小菊，权玉玲 沙门菌广泛分布于自然环境中，是一种重要的食源性致病菌，也是常见的人兽共患病原菌，可感染人和多种哺乳动物。人类主要是通过摄入被沙门菌污染的水和食品，导致食物中毒及肠道疾病的发生，可能引起食源性疾病的暴发。沙门菌是全球食源性腹泻疾病的主要致病菌[1-2]，我国每年腹泻病中70%以上是由沙门菌感染引起的[3]，尤其是婴幼儿细菌性腹泻中沙门菌感染居首位[4]。 迄今为止，已发现的沙门菌血清型有2 600多种[5]，其中非伤寒沙门菌是引起儿童感染性腹泻疾病中最常见的病原菌[6]。近年来随着抗生素的广泛使用，全球范围内沙门菌耐药现象日益严重，已成为世界性的公共卫生问题[7-8]，耐药菌株的流行增加了对抵抗力较弱的婴幼儿临床治疗难度。本研究对兰州市2018-2020年哨点医院收集的腹泻患儿粪便标本进行血清学分型及药敏试验，并结合PFGE分型技术对菌株进行同源性分析，为沙门菌引起的腹泻病临床诊疗和溯源提供科学依据。 1 材料与方法 1.1 样本来源 2018-2020年兰州市哨点医院腹泻患儿粪便标本中分离的149株沙门菌菌株。 1.2 仪器与试剂 Vitek 2 Compact 全自动微生物鉴定仪(法国生物梅里埃公司)或PhoenixTM全自动细菌鉴定仪(美国BD公司)，脉冲场电泳仪、Gel Dol XR 凝胶成像系统(美国Bio-Rad公司)。 沙门菌显色培养基(法国科玛嘉公司)、XLD(美国BD公司)，Swarm Agar(北京路桥公司)，沙门菌诊断血清(丹麦SSI公司，泰国SA公司)，革兰氏阴性菌药敏检测板(上海星佰生物技术有限公司)，限制性内切酶XbaI(美国New England Biolabs公司)，蛋白酶K(Amresco)，大肠埃希标准菌株(ATCC 25922)，沙门菌标准菌株(ATCC H9812)。 1.3 检测方法 根据国家《食源性疾病监测工作手册》，将哨点医院上送的可疑菌株经选择性平板分离后纯化，并使用全自动微生物鉴定仪进行系统生化鉴定。采用《沙门菌属血清型诊断》中玻片凝集方法，确定对应血清型。按照美国临床和实验室标准化协会推荐的微量肉汤稀释法对菌株最低抑菌浓度进行药敏测定。根据美国PulseNet沙门菌PFGE生物标准方法对沙门菌分子分型，H9812作为质控菌株。 2 结 果 2.1 沙门菌流行特征 2018-2020年从腹泻患儿粪便中检出149株沙门氏菌，其中2018年检出32株，2019年检出65株，2020年检出52株。感染季节分布以夏秋季(5-10月)为主，占全年的90.60%(135/149)。患儿年龄分布以1～3岁的幼儿居多，占59.73%(89/149)；其次为1岁以下的婴儿，占20.81%(31/149)；3～6岁幼儿及6岁以上的儿童依次占12.08%(18/149)、7.38%(11/149)。 2.2 沙门菌血清型分布 149株沙门菌共鉴定出33个血清型，以D群和B群为主，分别占46.31%和37.58%。其中肠炎沙门菌和鼠伤寒沙门菌为流行的主要血清型别，分别占30.87%和28.19%，见表1。 表1 沙门菌血清型分布Tab.1 Salmonella serotype distribution 2.3 沙门菌耐药特征 药敏试验结果显示95.97%(143/149)沙门菌对14种抗生素存在不同程度的耐药，其中氨苄西林耐药率(79.87%)最高，四环素(65.10%)、萘啶酸(59.73%)、头孢唑啉(52.35%)、氨苄西林/舒巴坦(46.31%)的耐药率均在45%以上；对亚胺培南和头孢西丁较敏感，敏感率分别为95.30%和93.96%，见表2。 表2 沙门菌对各种抗生素的耐药情况Tab.2 Drug resistance of Salmonella to various antibiotics 两种优势血清型肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌除对亚胺培南敏感外，对其他抗生素均有耐药性，耐药率分别为97.82%(45/46)、97.62%(41/42)。肠炎沙门菌主要耐受萘啶酸、氨苄西林、头孢唑啉，耐药率分别为93.40%、84.70%、52.40%；鼠伤寒沙门菌主要耐受四环素、氨苄西林，耐药率分别为92.80%、85.70%，见图1。 图1 沙门菌对各种抗生素的耐药率Fig.1 Resistance rate of Salmonella to various antibiotics 149株沙门菌有117株为多重耐药，多重耐药率为78.52%，共产生78个多重耐药谱。其中鼠伤寒沙门菌有29个多重耐药谱，多重耐药率为80.95%(34/42)，5种及5种以上的耐药菌株