减数分裂重组的分子遗传机制研究进展及在作物育种中的应用.docxVIP

? ? 减数分裂重组的分子遗传机制研究进展及在作物育种中的应用 ? ? 黄霁月，王 聪，王应祥, (1 华南农业大学 生命科学学院/ 岭南现代农业科学与技术广东省实验室,广东 广州 510642； 2 复旦大学 生命科学学院, 上海 200438) 减数分裂是生殖细胞中产生单倍体配子的一种特殊细胞分裂方式，产生的雌雄配子通过受精融合后恢复至二倍体状态，对基因组的稳定性至关重要。同源染色体重组和染色单体的自由组合显著促进了后代的遗传变异。然而，减数分裂重组在染色体上的分布和数量限制了育种进程中的等位基因变异或整合。因此，改变减数分裂重组事件的数量和分布对改善和加快植物育种具有很大的应用潜力。近年来，对植物减数分裂过程和重组的研究取得了很大进展。在模式生物拟南芥Arabidopsis thaliana中，许多参与调控减数分裂染色体重组的因子被发现。模式植物拟南芥的研究显著带动了其他物种(包括水稻、大麦、玉米、小麦和芸苔属植物等)减数分裂的重组机制研究。因此，充分认识植物减数分裂重组的分子遗传基础，并比较不同物种间的共性和特性，再结合现代分子育种技术，可以显著拓展现代生物育种的方法。 1 减数分裂重组模型 1.1 染色质上的重组骨架-牵回环-轴复合物的形成 基于电子显微镜、超分辨率显微镜和免疫荧光技术的应用，主流的观点接受减数分裂染色体重组的起始依赖于一种称为牵回环-轴复合物(Tethered loop-axis complex)的染色质-蛋白质结构模型[1]。首先，在减数分裂前DNA复制完成后形成的姐妹染色单体通过减数分裂特异的黏连蛋白REC8(Cohesin)联系成一体；从细线早期开始，REC8、ASY1和ASY3[2-3]等蛋白质与绑定在其上的DNA 环(DNA-loop)一起形成一个线性的轴，使得结合了REC8的DNA沿着轴的方向排列形成了一个个染色质环(Chromatin loop)，统称为牵回环-轴复合物结构(图1)。 1.2 双链断裂形成 在形成的牵回环-轴复合物结构基础上，细胞程序性诱导DNA双链断裂(Double-strand breaks,DSBs)由包含SPO11[4]和MTOPVIB[5]的类DNA拓扑异构酶VI复合物介导产生。植物具有3个编码SPO11的同源基因，其中只有SPO11-3不参与减数分裂[6]；而SPO11-1和SPO11-2以异源二聚体构成减数分裂拓扑异构酶复合物的一部分，为诱导减数分裂DSBs所必需[7](图2)。除了SPO11复合物，在酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中还有至少9种包含Spo11在内的DSB相关蛋白，其中Mre11、Rad50、Xrs2、Ski8、Rec102、Rec104、Rec114、Mei4和Mer2能够形成不同的亚复合物，为Spo11产生DSB所必需[8]；它们在植物中对应的同源蛋白是AtPRD1、AtPRD2、AtPRD 3、At DFO、OsCR C1、OsSDS和OsP31comet(OsBVF1)[9-12]。酿酒酵母中的研究发现，细胞核内的Spo11蛋白存在2种状态：与染色质不重合的游离态和与轴重合的结合态；DSB主要发生在染色质环内，而大多数对DSB形成至关重要的Spo11辅助蛋白则位于轴上[13]，这呼应了牵回环-轴复合物中“牵回”的含义-酿酒酵母中含PHD结构域的Set1复合物成员Spp1能够与染色质环中基因启动子区附近的H3K4me2/3结合，并通过与染色体轴上的Spo11辅助蛋白Mer2互作[13]，将染色质环牵回染色体轴上。这是第1次以牵回环-轴复合物结构为基础，解释DSB形成的分子机制的尝试(图1)。植物中鲜见类似的作用机制，但是已有的一些结果也印证了该模型在植物中也可能成立：ChIP-seq结果显示，定位于轴向元件的REC8和DSB结合的染色质区域不同[14]；在重组富集的基因区，标记DSB位点的SPO11-1-oligos与ASY1和REC8在全基因组水平无显著的正相关性[14-15]。 图1 植物减数分裂染色体的牵回环-轴模型Fig. 1 The model of tethered loop-axis of meiotic chromosomes in plant 1.3 双链断裂末端加工 酵母中的工作表明，Spo11在切割DNA双链产生DSB后，通过其酪氨酸残基共价连接在断裂的5′末端DNA上[4,16]，如不及时移除将会对后续的修复造成直接阻碍[8]。MRX/N复合物[Mre11-Rad50-Xrs2(Nbs1)]和Com1(Sae2)共同完成DSB处Spo11结合的5′单链末端的移除，从而产生单链的3′末端[8](图2)。在拟南芥中也有这4个基因的同源基因。其中At MRE11、At RAD50和A