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吴茱萸水提物大鼠亚慢性毒性试验 吴茱萸是广州科的一种植物，具有吴茱萸（juss.）、石虎（juss.）、胡枝县等。维护所。主产于贵州、广西、云南、四川、浙江、湖南和陕西等地。吴茱萸味辛、苦, 热, 有小毒, 归肝、脾、胃和肾经。具有散寒止痛, 降逆止呕, 助阳止泻的功效。用于厥阴头痛, 寒疝腹痛, 寒湿脚气, 行经腹痛, 脘腹胀痛, 呕吐吞酸, 五更泄泻的治疗 1 物理分化 吴茱萸属植物中主要化学成分包括生物碱、香豆素、黄酮类、萜类 (主要是苦味素) 、色原烷和酰胺等6大类 2 现代毒性研究与毒性机制 2.1 对小鼠的毒力 将1.00、2.15、4.64和10.00 g/kg吴茱萸水提物或70%乙醇提取物灌胃昆明小鼠, 在随后的7 d内未观察到中毒及死亡情况 2.2 连续给药毒性试验 亚急性毒性试验:吴茱萸水提物6、12和24 g/kg (按生药量计算) 连续灌胃SD大鼠4周。与对照组相比, 给药组的心脏系数、脾脏系数、肝脏系数、甘油三酯、总胆红素、肌酐和总胆固醇含量有明显变化。病理切片观察到吴茱萸各组的肝、肾组织均有细胞凋亡增多现象 亚慢性毒性试验:吴茱萸水提取物1.67、4.98和16.67 g/kg (按生药量计算) 每日灌胃SD大鼠, 连续给药30和90 d以及停药恢复性观察14 d。吴茱萸水提物重复给药, 对大鼠有一定的毒性, 肝是重要毒性靶器官之一, 主要表现为肝脏系数升高、总胆固醇升高, 量效关系明显。病理可见部分动物肝细胞胞浆疏松, 肝细胞灶性坏死, 肝组织病理学特点表现为以中央静脉、小叶下静脉周围 (或者是肝腺泡3带) 为主的肝细胞变性、坏死。停药恢复14 d, 少部分动物肝损害未恢复。吴茱萸水提物大鼠给药后期及停药14 d后脾肿大, 呈剂量相关性。高、中剂量组大鼠血红蛋白降低, 网织红细胞含量升高, 红细胞分布宽度增大, 对红系细胞具有一定的影响。给药期间, 雄性大鼠体重增长较正常对照组缓慢, 雌鼠体重无明显影响, 睾丸系数升高考虑由体重减低影响所致。给药30和90 d血糖降低呈明显量效关系 2.4 连续灌胃对大鼠肝毒性的影响 单次给药:32.5 g/kg吴茱萸水提物 (按生药量计算) 单次灌服昆明小鼠后, 小鼠血清丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶均在给药后2 h达到高峰;肝组织病理学检查显示, 吴茱萸水提组分可在给药8~72 h内对肝组织产生明显损伤。1.1、2.1、4.1、8.2、16.3和32.5 g/kg吴茱萸水提物 (按生药量计算) 单次灌服昆明小鼠对肝组织产生不同程度的损伤, 且随着剂量增大, 丙氨酸转氨酶和天冬氨酸转氨酶升高显著, 呈剂量依赖关系 多次给药:吴茱萸挥发油0.25~1.25 ml/kg连续灌服7 d可造成昆明小鼠明显的肝毒性损伤, 表现丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶碱性磷酸酶、总胆红素升高, 白蛋白降低, 肝脏系数增高, 病理组织学检测出现不同程度的肝细胞水肿和脂肪变性、间质充血, 呈现一定的量毒、时毒关系 有研究报道吴茱萸水提物致大、小鼠肝毒性得到了截然相反的试验结果。54 g/kg吴茱萸水提物 (按生药量计算) 连续灌胃昆明小鼠28 d后血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶较正常对照组相比明显升高, 且病理切片显示吴茱萸水提物组肝细胞体积增大, 肝细胞核膨化, 个别样本出现单个细胞坏死。40 g/kg吴茱萸水提物连续灌胃Wistar大鼠28 d后, 与正常组相比, 吴茱萸水提物组大鼠血清丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶在给药28 d后未出现明显变化, 肝病理切片也未表现出明显的病理改变。提示吴茱萸水煎液对大、小鼠肝毒性存在种属差异 2.5 吴两种碱对肝肾细胞的抑制作用 MTT法显示, 2、4μg/ml的吴茱萸次碱会使人正常肝细胞 (HL7702) 、人胚胎肾细胞 (HEK293) 活力下降, 并且抑制的程度呈剂量依赖性, 相同浓度下的吴茱萸次碱对肝细胞的抑制作用大于肾细胞。上述细胞倒置显微镜下的细胞形态均未发生明显变化。4μg/ml的吴茱萸次碱会使肝细胞上清液中的天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶和乳酸脱氢酶水平升高 (P0.01) 。吴茱萸次碱作用于肾细胞24 h后, 各给药组上清液中的尿素氮、肌酐和乳酸脱氢酶水平均无明显变化 2.7 药物相互作用 体外试验显示吴茱萸碱和吴茱萸次碱有抑制人肝微粒体CYP3A4的作用 3 致突变性与毒副反应的相关性研究 吴茱萸急性毒性试验结果表明, 10 g/kg吴茱萸水提物或70%乙醇提取物未对小鼠产生毒性作用或造成小鼠死亡 吴茱萸水提物亚慢性毒性试验结果没有得出NOAEL剂量, 低剂量组1.67 g/kg吴茱萸水提取物灌胃SD大鼠90 d, 对大鼠血糖及肝脏系数 (按生药量计算) 造成显著影响, 且恢复14 d后肝脏系数变化无法恢复 体外、体内基因及染色体变