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索氏提取法制备油茶生物活性成分 油茶属于山茶科，是多年生小树和灌木。它不仅是中国南方的重要经济林木，也是中国独特的多年生木本油料出版物。 油茶活性物质的研究首先需在保留其生物活性的前提下, 进行提取和测定, 因此油茶活性物质提取过程中研究茶油的有效提取和准确测定具有必要性。目前, 茶油的提取方法主要有有机溶剂浸出法、水代法、水酶法、超临界CO 1 材料和方法 1.1 油茶籽的采集 普通油茶、广宁红花油茶、小果油茶、高州油茶 分别由广东省韶关市曲江区小坑国营林场、广宁康帝公司、广东省兴宁市林业科学研究所、广东省高州市林业科学研究所提供, 均为2015年11月~12月采收成熟的油茶籽, 部分压榨成饼粕;无水乙醇 广州化学试剂厂;石油醚 (沸点60~90℃) 天津化学试剂厂;丙酮、无水乙醚、乙酸乙酯、正己烷 天津市大茂化学试剂厂。 AR423CN千分之一电子天平 奥豪斯仪器 (常州) 有限公司;SXT-06索氏抽提器三台和HWS-26数显恒温水浴锅 上海洪纪仪器设备有限公司;DHG-9240X电热鼓风干燥箱 上海一恒科学仪器有限公司;AWL-1001-U超纯水系统 美国艾科浦国际有限公司;SB-5200DTN超声波清洗机 宁波新芝生物科技有限公司;超速离心机 德国Eppendorf公司。 1.2 除大颗粒、成小颗粒 利用高速粉碎机将油茶整籽、种仁和饼粕粉碎成小颗粒后, 用60目筛去除大颗粒。过筛后经75℃烘干至恒重, 分装于密封袋中, 室温保存、干燥备用。 1.3 实验方法 1.3.1 单因素实验设计 普通油茶籽为原料, 采用索氏抽提法, 分别对提取时间 (2、4、6、8、10、12 h) 、提取温度 (60、65、70、75、80、85℃) 、有机溶剂种类 (无水乙醇、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、丙酮、无水乙醚) 、单次样品重量 (1、2、4、6、8、10 g) 四个因素分别进行单因素实验, 重复3次取平均值, 考察各个因素对普通油茶籽含油率的影响, 测定提取前、后普通油茶籽质量并计算其含油率。 1.3.2 单次样品重量对含油率的影响 单因素实验表明, 索氏抽提法提取茶油组分时, 提取时间、提取温度、有机溶剂种类和单次样品重量对含油率均有不同程度的影响。普通油茶籽为原料, 根据单因素实验结果和正交实验原理为基础进行4因素4水平实验L 1.3.3 测试实验 1.3.3. 1.二次提取 采用正交实验的最佳优化条件, 进行连续两次索氏提取, 计算第二次含油率, 对正交优化实验结果进行验证。 1.3.3. 2.沱水处理 索氏法提取许多植物油脂的最佳有机溶剂为无水乙醚 1.3.4 测定了油茶含油量 在优化后的索氏抽提条件下, 分别对普通油茶、广宁红花油茶、小果油茶和高州油茶的整籽、种仁和饼粕含油率进行测定和对比。 1.3.5 计算方法 式中, G 1.4 处理数据 采用Excel 2010和Graph Pad Prism 7软件对实验数据进行差异分析和作图。 2 结果与分析 2.1 索西夫提取的单因素实验 2.1.1 单因素分析分析 在抽提温度75℃、有机溶剂石油醚、单次样品重量10 g的条件下, 以普通油茶籽为原料, 对提取时间 (2、4、6、8、10、12 h) 进行单因素分析。由图1可知, 随着提取时间 (2~12 h) 的延长, 传质逐渐达到平衡, 含油率提高, 提取时间为6 h时含油率趋于稳定;随后增加提取时间, 含油率增长缓慢。其原因可能是随着提取时间的延长, 油茶籽中的油脂逐渐被有机溶剂溶解析出, 在6 h以后茶油几乎被完全提取。通过单因素方差分析得知, 在6 h后差异不显著 (p0.05) , 因此选择提取时间为6~12 h作为正交优化实验的因素值。 2.1.2 索氏法提取油茶的方法 在抽提时间8 h、有机溶剂石油醚、单次样品重量10 g的条件下, 以普通油茶籽为原料, 考察温度 (60、65、70、75、80、85℃) 对索氏法提取茶油的影响, 结果如图3所示。在温度60~85℃时, 含油率随提取温度的升高而提高, 含油率在80℃时达到平衡点;当温度继续升高时, 含油率没有显著变化 (p0.05) 。这可能是因为温度的升高加快了分子间的热运动, 进而加快溶质的扩散和溶剂的渗透 2.1.3 有机溶剂的影响 在抽提时间8 h、提取温度75℃、单次样品重量10 g的条件下, 以普通油茶籽为原料, 分别选取无水乙醇、石油醚、正己烷、乙酸乙酯、丙酮和无水乙醚作为有机溶剂进行单因素实验。由图3可知, 不同有机溶剂对油茶籽油的溶解性不相同, 丙酮和无水乙醚分别为有机溶剂时, 普通油茶籽的含油率最高, 其次分别是石油醚、乙酸乙酯和正己烷, 最后无水乙醇为溶剂的含油率最低。无水乙醚极易挥发且低浓度可致人昏迷, 不适合作为