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糖尿病心肌病的发病机制及防治 糖尿病心肌病被定义为糖尿病引起的特定心肌病，其主要特征是左心室增大和心率降低。这是糖尿病并发症之一。 新近的研究表明, ERS贯穿于糖尿病心肌病的发生、发展过程, 与诸多病理因素、病理过程存在密切联系。ERS可以激活多种稳态信号通路, 其中非折叠蛋白反应最为重要。葡萄糖调节蛋白78 (glucose regulated protein78, GRP78) 是关键非折叠蛋白伴侣, 也是ERS标志分子之一 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 实验动物 1.1.2 grp钢的合成 阿利沙坦酯购自深圳信立泰公司;链脲佐菌素 (streptozotocin, STZ) 购自Biosharp公司;兔抗大鼠GRP78抗体、兔抗大鼠SERCA2a抗体均购自Abclonal公司;Trizol试剂盒购自Ambion公司;Hi Script Q RT Super Mix for q PCR试剂盒、Ace Q q PCR SYBR Green Master Mix试剂盒均购自诺维赞公司;PCR引物由上海生物工程公司合成。 1.1.3 超声、血红蛋白仪器 One TouchⅡ血糖仪 (罗氏公司) , Philips i E33超声系统 (飞利浦公司) , 血细胞分析仪XT-1800i (Sysmex公司) , Light Cycler 480ⅡPCR仪 (罗氏公司) 。 1.2 方法 1.2.1 动物组 SD大鼠30只随机等分为正常组 (NC组) 、糖尿病组 (DM组) 、糖尿病+阿利沙坦酯治疗组 (AL组) , 每组10只。 1.2.2 模型和药物 大鼠禁食12 h后腹腔注射1%STZ (55 mg·kg 1.2.3 左室收缩期内,左室射血分数 12周后, 心脏彩超检测大鼠左室舒张末期内径 (left ventricular end-diastolic dimension, LVDd) 、左室收缩末期内径 (left ventricular end-systolic dimension, LVDs) 、左室射血分数 (e-jection fraction, EF) 和左室短轴缩短率 (left ventricular fractional shortening, LVFS) 。 1.2.4 血糖和总胆固醇的测定ct 1.2.5 大心肌组织特征的制备 大鼠处死后取出心脏, 用PBS冲洗干净, 称重后取左心室心肌组织, 分成2份, 分别放入-80℃冰箱和多聚甲醛保存。 1.2.6 grp钢的检测 BCA测定心肌组织蛋白含量, 配平后SDS垂直电泳, 湿转膜封闭, 分别加入对应的兔抗大鼠GRP78、SERECA2a抗体, 过夜羊抗兔Ig G孵育, 洗膜后应用Odyssey双色红外激光成像系统扫描并在Image J软件中进行灰阶测定, 各条带与β-actin条带的灰阶之比为蛋白相对量。 1.2.7 grp钢在grp钢dna扩增中的扩增 用Trizol试剂从心肌提取总RNA, 用Super Mix试剂盒逆转录得到c DNA, 使用Master Mix试剂盒配制PCR反应液, Real-time PCR仪扩增GRP78、SERCA2a基因片段, 引物RNA序列见表1。通过荧光强度达到阈值的Ct值分别计算△△Ct。GRP78、SERCA2a mRNA的相对表达量用2 1.2.8 he观察小鼠左室心肌组织 取多聚甲醛固定好的心肌组织制备石蜡切片, 脱蜡HE染色后, 光镜400倍下观察心肌组织病理特征。 1.3 分析软件及分析 各参数均以均数±标准差表示, 并使用SPSS 24.0软件进行分析。组间差异比较采用ANOVA, 使用LSD检验比较两两差异, P0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 fs值、心体比、fs值变化 阿利沙坦酯干预12周后, 与NC组相比, DM组大鼠EF值和LVFS值显著下降 (P0.01) , 心体比显著增加 (P0.01) ;与DM组大鼠相比, AL组大鼠EF值和LVFS值增加 (P0.05) , 心/体重减小 (P0.05) 。见表2。 2.2 dm组与al组血糖比较 阿利沙坦酯干预12周后, DM组与AL组体重无差异 (P0.05) , 较NC组下降 (P0.01) ;DM组与AL组血糖无差异 (P0.05) , 均高于NC组 (P0.01) ;DM与AL组大鼠间TC无差异 (P0.05) , 较NC组高 (P0.01) ;见表3。 2.3 grp钢在al和dm两组中表达情况 阿利沙坦酯干预12周后, 与NC组比较, DM组GRP78蛋白升高 (P0.01) , SERCA2a蛋白降低 (P0.01) ;与DM组比较, AL组GRP78蛋白下降 (P0.01) , SERCA2a蛋白升高