阿利吉仑对肿瘤恶病质小鼠的影响及其机制.docxVIP

阿利吉仑对肿瘤恶病质小鼠的影响及其机制 晚期肿瘤患者的肿瘤恶病质发生率很高，与肿瘤类型没有固定关系。30% 恶性肿瘤患者死亡的直接原因为恶病质,而不是肿瘤本身 1 材料和方法 1.1 elasa检测相关试验剂盒 SPF级雄性BALB / c小鼠,6 ~ 8 周龄,体质量21 ~ 25 g[重庆医科大学实验动物中心,合格证号:SYXK( 渝) 2012-0001]; 阿利吉仑( 美国诺华公司) ;ELASA检测相关试剂盒( RD公司) ; Bnip3、LC3 抗体( Abcam公司) ; Beclin1、β-actin抗体及相应二抗( Proteintech公司) ; 氧化应激指标检测试剂盒( 南京建成生物工程研究所) ; real-time PCR试剂盒( Ta KaRa公司) ; Western blot相关试剂盒( 碧云天生物有限公司) 。 1.2 小鼠腓肠肌相关指标检测 1. 2. 1 动物分组及处理: 32 只BALB / c小鼠适应性喂养1 周后随机分为4 组,每组8 只: 对照组( Con) ; 肿瘤恶病质组( CA) ,取对数增殖期的C26细胞接种于小鼠左侧腋窝皮下( 约1 × 10 1. 2. 2 动物一般状态观察及腓肠肌纤维横切面积检测: 每日定时观察小鼠毛发、精神状况、体质量、自发性活动及肿瘤生长情况。小鼠自发性活动采用ZH-ZFT型视频记录分析系统检测。肿瘤体积按公式V = ab2 /2 计算,a、b分别表示长度和宽度。第20天采用戊巴比妥钠麻醉小鼠,摘除眼球取血,剥离肿瘤及腓肠肌并称重。右侧腓肠肌保存于液氮中,用于ELISA、real-time PCR和Western blot等检测。左侧腓肠肌置于4% 多聚甲醛中固定48 h,按常规方法脱水、包埋,切片,苏木精/伊红( HE) 染色,每个标本取3 张切片,每张切片取5 个视野,于200 倍光镜下采集图片,运用Image Pro Plus 6. 0 软件测量各组小鼠腓肠肌纤维横切面积。 1. 2. 3 ELISA法检测血清肾素、Ang Ⅱ水平及血清和腓肠肌TNF-α 和IL-66 水平: 4 ℃静置静脉血1 h,3 000 r / min、4 ℃ 离心10 min,取上清液; 将腓肠肌加入缓冲液中匀浆,12 000 r/min、4 ℃ 离心10 min,取上清液。采用ELISA法检测肾素、血管紧张素Ⅱ、TNF-α 和IL-66 水平,按试剂盒说明书操作。 1. 2. 4 比色法检测腓肠肌组织氧化应激指标: 腓肠肌组织按上述方法匀浆,取上清液。采用硫代巴比妥酸( TBA) 法测定MDA含量,黄嘌呤氧化酶法及原型谷胱甘肽法测定SOD和GSH-Px活性,按试剂盒说明书操作。 1.2.5 Real-time PCR检测腓肠肌Binp3、LC3和Beclin1 mRNA表达水平:采用Trizol提取腓肠肌总RNA,测浓度和纯度后反转录合成c DNA。按SYBR 1.3 b数标准差 采用SPSS17. 0 软件进行数据分析,计量资料以均数 ± 标准差( ue0af ± s) 表示,多组间比较采用单因数方差分析法,两组间均值比较采用SNK-q检验。采用Graph Pad Prism 5 软件作图。 2 结果 2.1 各组大鼠体质量及自发活动比较 接种后第6 天,荷瘤小鼠皮下可触及肿瘤结节。第12 天,与Con组比较,AT和CA组小鼠出现毛发粗糙、失去光泽,精神萎靡,自发性活动减少,体质量显著下降( P 0. 05) 。第20 天,与CA组比较,AP和AT组体质量及自发性活动均增加,且AP组大于AT组( P 0. 05) ; AP和AT组小鼠肿瘤质量和体积均低于CA组,且AP组低于AT组( P 0. 05) ( 表1,图1) 。 2.2 各组小鼠腓肠肌质量及纤维横切面积的比较 CA组腓肠肌质量及纤维横切面积均明显低于Con组( P 0. 01) ; 与CA组比较,AT组腓肠肌质量及纤维横切面积分别增长了27. 48% 和21. 11%( P 0. 05) ,AP组分别增加了55. 82% 和48. 43%( P 0. 05) ( 图2,表2) 。 2.3 已使用一定的程序,即营造良好的氛围。p0.0.0 与Con组比较,CA组血清肾素和AngⅡ水平均明显增加( P 0. 01) 。与CA组比较,AP和AT组经ASK干预后血清肾素和AngⅡ水平均下降,且AP组下降程度大于AT组( P 0. 05) ( 表3) 。 2.4 各组小鼠血清和腓肠肌组织tnf-和il-6水平比较 CA组血清及腓肠肌组织TNF-α 和IL-6 水平均显著高于Con组( P 0. 01) 。与CA组比较,AT组血清及腓肠肌组织TNF-α 和IL-6 水平分别减低了21. 84% 、29