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40种中草药提取物体外抗氧化活性研究 二氧化硫是传统果酒生产中必要的添加剂。由于它的许多问题，它引起了人们的注意。法国和欧盟等国家法律规定,果酒商标上必须标明二氧化硫的含量。寻找出替代二氧化硫的方法,降低其在果酒中的含量,生产出绿色健康的果酒已经成为必然趋势。王华 中草药资源是我国宝贵的财富,很多中草药都含有丰富的抗氧化成份,故在中草药里寻找一种能应用在果酒酿造中的抗氧化剂从理论上分析是可行的,使减少果酒酿造过程中二氧化硫的用量成为可能。本研究选取40种具有抗氧化作用的中草药作为试验材料,采用总还原力、DPPH·清除率、O 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 中药 试验所用中草药购自西安藻露堂药店徐家湾中药店。 1.1.2 新型羟基催化剂 DPPH(2,2-Diphenyl-1-hydrazyl):Sigma公司;福林酚(Folin-Ciocalteu):Sigma公司;Tris(三羟基氨基甲烷,Tris-hydroxymethy aminomethane):上海山浦化工有限公司;邻苯三酚(焦性没食子酸,Pryrogallic acid):贵州遵义佳宏化工有限责任公司;其他试剂均为国产分析纯:由华星试剂公司代购。 1.1.3 设备和设备 水浴锅,旋转蒸发仪,水循环真空泵,真空干燥箱,722型可见分光光度计,紫外分光光度计。 1.2 抗氧化能力的测定 采用水提法提取中草药中的抗氧化成分,经浓缩和真空干燥后得到固体粉末,用蒸馏水复溶,配成浓度为1 mg/mL的溶液进行抗氧化能力的测定。 1.3 提取物总还原能力 取2 mL待测液,加入2 mL PBS(pH6.6)和1%K 1.4 dpph贮备液的配制 准确称取DPPH试剂0.015 8 g,用无水乙醇溶解后移入200 mL容量瓶中,并用无水乙醇定容,即得浓度为0.2 mmol/L的DPPH贮备液,置于冰箱中冷藏备用。 向2 mL DPPH贮备液中加入2 mL待测液,充分混匀,于室温下在暗室中放置30 min后,在517 nm处测定吸光度值A 1.5 邻苯三酚用量的测定 取0.05 mol/L pH 8.2的Tris-HCl缓冲液4.5 mL于试管中,置于25℃水浴中预热25 min后,依次加入0.1 mL待测液和2.5 mmol/L的邻苯三酚溶液0.4 mL,充分混匀后,于25℃水浴中准确反应4 min,立即用8 mol/L的浓盐酸两滴终止反应,并在299 nm处测其吸光度值A 1.6 提取物提取对于h的澄清 取2 mmol/L Fe 1.7 福林酚法测定了梨酒的总酚含量 1.7.1 福林酚试剂的制备 用移液管精确量取添加了中草药提取物的梨酒样品0.5 mL于50 mL容量瓶中,加入30 mL蒸馏水,摇匀,再加入2.5 mL福林酚试剂和7.5 mL 20%的Na 1.7.2 标准曲线的构建 准确量取0.1 mg/mL的没食子酸0,0.5,1,1.5,2,2.5,3 mL于50 mL容量瓶中,各加30 mL水,以下同上。 2 结果与分析 40种中草药提取物的抗氧化能力见表1。 2.14 种中草药提取物的总还原力 由表1可以看出,槐花、丁香、青果具有较强的总还原力,分别达到0.687,0.612和0.478,在还原力方面具有突出的能力,从一个方面反映了以上几种中草药具有抗氧化的潜力。 2.24 种中草药提取物对dpph的清除率 由表1可以看出,除枸杞等5种提取物DPPH·的清除率小于50%外,其余35种提取物对DPPH·的清除率均大于50%,其中,有11种提取物对DPPH·的清除率达到了90%以上,有3种提取物对DPPH·的清除率达到了95%以上,它们分别是丹参、山萸肉和青果提取物。 2.34 0-中药提取物与o 由表1可以看出,丁香、芦柑皮、脐橙皮、荷叶、花椒、山萸肉、枸杞、槐花和甘草等提取物对O 2.44 不同的中草药提取物对不同自由基的清除能力 由表1可以看出,丹参、花生壳、荷叶和女贞子等提取物具有较强的·OH的清除能力,其清除率均达到了95%以上。 从以上的试验结果可以看出,不同的中草药提取物对同种自由基的清除能力相差比较大,同一种中草药提取物对于不同的自由基也有不同的清除能力。这可能是因为不同的中草药所含有的抗氧化有效成分的种类和含量不同,而且不同的抗氧化物质对不同的自由基的清除效果也不尽相同。 综合考虑总还原力、DPPH·清除率、O 2.59 中药提取物对梨酒的抗逆性 2.5.1 标准曲线的构建 所得标准曲线如图1所示。 式中:y—吸光度值;x—总酚含量(μg/mL) 2.5.2 发酵过程中总多酚含量的变化 从上述40种中草药中挑选出抗氧化性能较好的9种应用于梨汁的发酵,其对梨酒中总多酚含量的影响如表3。 从表3可以看出,发酵时期表现出抗氧化作用较好的中草药有