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多不饱和脂肪酸对鸭脂质和srebp1基因表达的影响 固醇调节元、蛋白质是控制脂肪合成和脂质吸收的重要因素。这些蛋白的前体被定位在含有蛋白质的内质网膜上。当醇水平降低时，srebps转移到高尔基体，成熟的蛋白体被酶释放，成熟的srebps进入心脏，并与含有sre元素基因的启动子结合开始旋转。 1 材料和方法 1.1 组试验结果 同批出雏的樱桃谷母鸭90只, 2周龄随机分成3个组, 每组3个重复, 每个重复10只。Ⅰ组:基础饲粮;Ⅱ组:基础饲粮+4%亚油酸;Ⅲ组:基础饲粮+4%二十碳五烯酸, 试验过渡期7d, 试验期49d。参照兰云贤 1.2 rarnasoregant和tiwscriprtk的设计 Total RNA提取试剂 (TaKaRa RNAiso Reagent) 和TIANscript RT Kit购自大连宝生物工程有限公司;Hieff 1.3 重复2只樱桃谷鸭的肝脏 4、6、8周龄时, 无菌条件下采集各处理组每个重复1只樱桃谷鸭的肝脏;10周龄时翅静脉采血后全部屠宰, 屠宰过程按《家禽生产性能名词术语和度量统计方法》 (NY/T 823-2004) 1.4 肌肉肌内脂肪酸检测 采集10周龄樱桃谷鸭胸肌和腹脂, 计算腹脂的百分比, 索氏抽提法提取胸肌肌内脂肪, 气质联用技术测定饱和脂肪酸、不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸和必需脂肪酸;分离10周龄樱桃谷鸭的血清 (无抗凝剂) , 根据试剂盒操作说明测定血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白。 1.5 实时荧光定量pcr检测 以鸭 1.6 处理数据 根据2 2 结果与分析 2.1 引物的pcr扩增 用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测提取的总RNA和2对引物的PCR产物 (图1) , 可见扩增条带28S和18S清晰 (图1-A) , 28S条带比18S亮, 且含量几乎是18S的2倍, OD 2.2 检测产物的基因型化和定量检测 利用合成的2对引物进行实时荧光定量PCR检测, 结果见图2。由图2可见, β-Actin和SREBP1基因扩增熔解曲线效果良好, 无其他非特异杂峰, 表明2对引物用于定量检测时不会扩增出其他非特异性产物而影响定量结果。 2.3 多饱和脂肪酸和支撑脂肪酸组p1 分析3个处理组樱桃谷鸭脂肪沉积指标的差异, 结果见表2。由表2可知:II组的饱和脂肪酸显著低于I组 (P0.05) , 多不饱和脂肪酸和必需脂肪酸显著高于I组 (P0.05) ;II组的甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白均显著高于I组 (P0.05) , 表明饲粮中添加亚油酸和二十碳五烯酸可影响机体脂肪酸组成, 引起甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白的升高, 且亚油酸的影响效果比二十碳五烯酸强, 但对腹脂、肌内脂肪、不饱和脂肪酸、低密度脂蛋白影响却不明显。 2.4 不同脂肪酸对鸭srebp1基因表达的影响 通过检测3个处理不同周龄樱桃谷鸭肝脏SREBP1基因mRNA表达水平 (表3) 表明, 3个处理组SREBP1基因的表达随周龄的增加而增加, I组各周龄的表达量均显著高于Ⅱ组和Ⅲ组 (P0.05) , Ⅱ组和Ⅲ组差异不显著 (P0.05) , 表明饲粮中添加2种脂肪酸均对鸭SREBP1基因表达有抑制作用。 2.5 回汁添加量选择 樱桃谷鸭SREBP1基因表达对Ⅰ组脂质指标的相关性分析结果见表4。由表4可知, SREBP1基因mRNA表达量除与饱和脂肪酸、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白不相关外 (P0.05) , 与其他7个指标显著相关 (P0.05) 。 3 脂肪酸和指标 SREBP1是调控肝脏脂质动态平衡的重要转录因子, 可激活多种参与脂肪酸和甘油三酯合成酶的转录, 包括乙酰辅酶A羧化酶 (ACC) 、脂肪酸合成酶 (FAS) 、硬脂酰辅酶A去饱和酶-1 (stearly coenzyme a desaturase-1, SCD-1) 等 本研究结果表明, 樱桃谷鸭饲粮中添加亚油酸和二十碳五烯酸可引起机体胸肌中饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、必需脂肪酸和甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白明显升高, 脂肪酸组成改变和血清升高, 且亚油酸的影响效果强于二十碳五烯酸;引起肝脏中SREBP1基因mRNA表达量下降;皮宇等