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3种多酶清洗剂的活度测定 如果重新设计医疗设备的清洁质量，它将直接影响消毒和无菌的质量，并影响患者的医疗安全和工作人员的安全。 1 材料和方法 1.1 脂肪酶的测定 多酶清洗剂:A (国产产品) 为一种绿色液体，B (美国进口产品) 为一种蓝色液体，C (美国进口产品) 为一种深蓝色液体，3种液体都均匀无沉淀，且处于保质期内。3种产品都标称含蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶。依据我国标准，蛋白酶和脂肪酶能检测到酶活度，而淀粉酶无法测定活度，所以本文仅对比蛋白酶和脂肪酶。 主要试剂:聚乙烯醇、橄榄油、95% (体积分数) 乙醇、氢氧化钠、甘氨酸、氯化钠、福林酚试剂、无水碳酸钠、三氯乙酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、L-酪氨酸、干酪素。 主要仪器:恒温箱、数显恒温振荡器、高速分散器、磁力搅拌器、分析天平、紫外-可见分光光度计、恒温水浴锅、pH计、微量滴定管。 1.2 方法 1.2.1 拘留条件 将每种多酶清洗剂分成两组，分别储存在25℃和40℃恒温箱中，恒温箱控温精度为0.1℃。 1.2.2 脂肪酶检测方法 采用国家标准GB/T23535-2009《脂肪酶制剂》中规定的电位滴定法测定清洗剂原液中脂肪酶活度 1.2.3 酶法的测定 采用国家标准GB/T23527-2009《蛋白酶制剂》附录B的福林法测定清洗剂原液中蛋白酶活度 2 结果 2.1 脂肪酶检测方法 存放前，A、B、C 3种多酶清洗剂的脂肪酶活度分别为0 u/ml、0 u/ml、388 u/ml。25℃和40℃储存条件下只有C多酶清洗剂能测出脂肪酶活度。25℃条件下，每隔8周测定一次，随着储存时间的增加，脂肪酶活度呈下降趋势，8周后C多酶清洗剂的脂肪酶活度下降至228 u/ml，下降了41.24%;56周后脂肪酶活度下降至112 u/ml，下降了71.13%，详见图1。40℃条件下，每隔1周测定1次，C多酶清洗剂1周内脂肪酶活度下降至94 u/ml，下降了75.77%;3周后下降至0。故，40℃时脂肪酶活度下降速度更快，详见图2。 2.2 蛋白酶活度测定结果 存放前，A、B、C 3种多酶清洗剂的蛋白酶活度分别为5 153 u/ml、4 289 u/ml、9 872 u/ml。25℃和40℃储存条件下，A、B、C 3种多酶清洗剂均能测出蛋白酶活度。在25℃条件下，每隔8周测定1次酶活度，8周后3种多酶清洗剂的蛋白酶活度均有明显下降。蛋白酶活度受清洗剂配方中蛋白酶种类、蛋白酶稳定剂和其他化合物的影响，配方设计不合理，蛋白酶活度下降速度会明显加快。从图3中可以看出，56周后A多酶清洗剂中蛋白酶活度下降至41 u/ml，下降了99.20%;B多酶清洗剂56周后蛋白酶活度下降至2 995 u/ml，下降了30.17%;C多酶清洗剂下降较少，56周后蛋白酶活度为8 929 u/ml，下降了9.55%。在40℃条件下，每隔6周测定蛋白酶活度，从图4中可以看出，6周后A多酶清洗剂蛋白酶活度下降至0，稳定性较差;B多酶清洗剂的蛋白酶活度下降也明显，36周后下降至1 011 u/ml，下降了76.43%;C多酶清洗剂蛋白酶活度略有下降，36周后下降至9 322 u/ml，下降了5.57%。 3 多酶洗涤剂的酶活度 随着WS 310新版标准的贯彻实施，多酶清洗剂被广泛应用于复用医疗器械的清洗，医院要关注使用中多酶清洗剂的酶活度。临床使用后的手术器械通常含有各种有机污染物，其中最主要的污染物就是血液，而血液的主要成分是蛋白质。蛋白酶专一分解蛋白质，清洗剂中蛋白酶活度越高其分解速率就越快。手术后附着在复用器械上的脂类化合物很难通过清水清洗干净，脂类化合物只能被脂肪酶分解，而不能被其他酶分解，如果清洗剂中无脂肪酶，将会影响器械上脂类化合物的清洗，增加灭菌失败的风险。临床使用后的器械上有机污染物各种各样，多酶清洗剂中生物酶种类越多、酶活度越高，其分解污物的能力就越强。目前医院探讨多酶清洗剂处理复用医疗器械的研究比较多，但是未见关于多酶清洗剂酶活度研究的报道。多酶清洗剂的核心是酶制剂，酶的种类、酶的活度和酶的稳定性是决定多酶清洗剂产品质量的关键因素，是衡量其去除器械上肉眼不可见有机污物的最重要指标。酶的活度容易受存放条件和温度等多种因素的影响，在储存和运输过程中，酶稳定性差会导致酶活度降低，导致产品中酶的种类减少或变成无酶的清洗剂，最终都会对清洗质量产生负面影响。在生物行业，液体酶制剂通常建议在4℃～8℃的条件下储存，以维持酶的活度在90 d内不发生快速下降 本文考察了25℃和40℃两个存储温度条件，25℃模拟清洗剂在仓储阶段和科室使用阶段的室内环境温度，40℃模拟清洗剂在夏季高温物流阶段以及进口产品为期3个月海运阶段的环境温度。本研究中A、B多酶清洗剂随着储存时间的延长，蛋白酶活度下降明显，而且未检测到其含有脂肪酶