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大蒜中三种主要蒜氨酸类化学成分的合成及鉴定 大蒜是单带白豆科的一种植物大蒜(。 1 材料和方法 1.1 gma公司的纺粘设备 S-甲基-L半胱氨酸:购自Sigma公司。 无水乙醇、氢氧化钠、L-半胱氨酸盐酸盐、乙酸、2-烯丙基溴、1-溴代正丙烷、30%H 1.2 plc和ms 搅拌器:85-2型恒温磁力搅拌器 上海司乐仪器有限公司;HPLC:LC-20AT 日本岛津公司;MS:Waters Quattro Micro API 美国Waters公司;核磁共振仪:Dpx-300MHz NMR 德国Bruker公司。 1.3 1.3.1 s-烯丙基-l-半胱氨酸的合成 L-半胱氨酸盐酸盐7.9 g溶于150 mL无水乙醇中, 不断搅拌下逐滴加入20 M的NaOH溶液11.25 mL。然后滴加8.7 mL 2-烯丙基溴, 搅拌2 min后将溶液转移至一个干净的烧瓶, 用乙酸调节pH到5.2。放置于24 h。过滤收集白色沉淀组分, 所得化合物干燥, 得到S-烯丙基-L-半胱氨酸。 将2-烯丙基溴用1-溴代正丙烷取代, 得到S-丙基-L-半胱氨酸。 1.3.2 s-烯丙基-l-半胱氨酸亚和s-丙基-l-半胱氨酸亚的合成 在0.6 M的S-甲基-L-半胱氨酸水溶液23 mL中加入1.75 mL30%H 将S-甲基-L-半胱氨酸分别用合成的S-烯丙基-L-半胱氨酸和S-丙基-L-半胱氨酸取代, 得到S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜和S-丙基-L-半胱氨酸亚砜。 1.3.3 流动相、柱温度和检测波长 色谱柱:Venusil MP C18 (25 cm×4.6 mm, 5 μm) ;流动相:V (甲醇) ∶V (水) 为10∶90;流速:0.4 mL/min;柱温:30 ℃;检测波长:205 nm;进样量:20 μL。 1.3.4 离子源温度 ESI正离子检测模式:毛细管电压:3000 V;锥孔电压:25, 40, 50 V;二级锥孔电压:0.3 V;六级杆透镜电压:3 V;离子能量:0.8;离子源温度:120 ℃ ;脱溶剂气温度:350 ℃;脱溶剂气 (N ) 流量:350 L/h;锥孔气 (N) 流量:50 L/h。 1.3.5 “三自”结构的应用 以D 2 结果与分析 2.1 化合物纯度测序 由图1可知, 三种合成化合物的保留时间分别为4.267, 4.771, 5.267 min, 各谱图中除了各自的主峰外再没有其它杂峰顶, 说明合成的化合物纯度较好。 2.2 半胱氨酸亚还原酶ms检测 S-甲基-L-半胱氨酸亚砜、S-丙基-L-半胱氨酸亚砜和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜三种合成物的MS谱图分别见图2中的A, B, C。 从蒜氨酸的结构特性, 可知其在酸性介质中是以阳离子的形式存在的。因此我们采用电喷雾的离子化方式, 在正离子的模式下检测。由图2可知, 三种合成化合物的[M+1] 2.3 2.3.1 浓度为5个月时,其与亚链内同时点背景耦合成3. S-甲基-L-半胱氨酸亚砜的 对图3进行解析如下: δ2.77, 3个H, 单峰, 因为与亚砜基团相连, 化学位移减小, 故应为CH δ3.35, 2个H, 因耦合成多重峰, 推测为-S (O) -CH δ4.18, 1个H, 与强吸电子基因相连, 推测为-S (O) -CH 2.3.2 裂采用-s-ch S-丙基-L-半胱氨酸亚砜的 对图4进行解析如下: δ0.99, 3个H, 因与-CH δ1.72, 2个H, 因与CH δ2.90, 2个H, 因与-CH δ3.32, 2个H, 裂分为多重峰, 且化学位移较低, 推测为-S-CH δ4.16, 1个H, 就为-CH-, 裂分为四重峰, 推测为-S-CH 2.3.3 裂采用远程耦合法和苏-ch-s的耦合关系 S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜的 对图5进行解析如下: δ3.35, 2个H, 化学位移较高, 可能与供电子基团相连, 又因为裂分为多重峰, 可能存在远程耦合, 推测为-CH-CH δ3.70, 2个H, 因化学位移较低, 可能与吸电子基团相连, 又因为裂分为两重峰, 推测为-S-CH δ4.18, 1个H, 应为-CH-, 裂分为四重峰, 推测为-S-CH δ5.48和δ5.86为端烯的特征化学位移, 其中, δ5.48, 2个H, 应为CH 3 s-脂肪族-l-半胱氨酸亚的合成 本实验以L-半胱氨酸盐酸盐为原料, 对大蒜中三种主要蒜氨酸-S-甲基-L-半胱氨酸亚砜、S-丙基-L-半胱氨酸亚砜和S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜进行了合成, 在合成过程中发现, 在S-脂肪族-L-半胱氨酸合成后需要尽快进行氧化实验得到其亚砜产物, 若长时间放置后再氧化, 得到产物的量极少。可能原因是S-脂肪族-L-半胱氨酸不稳定, 容易发生聚合等其它反应, 即使