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响应面法优化甘蔗渣木聚糖提取工艺 甘蔗是主要的糖厂副产品。据报道，从2007年到2008年，中国至少会产生4000万吨甘蔗。除了少量用于造纸外，这些甘蔗渣资源大多被燃烧和废弃，不仅造成资源浪费，而且严重污染环境。木聚糖是一种广泛存在于植物纤维中的多聚五碳糖,在玉米芯、甘蔗渣、稻壳以及棉子壳中含量较为丰富,一般能高达30%。其降解后所产生的低聚木糖不仅具有促进人体钙吸收、抑制病原菌等多重功效,而且还可以用作基本碳源生产各种发酵产品,包括有机酸、氨基酸、单细胞蛋白、燃料乙醇、木糖醇等,应用前景十分广阔。因此,从甘蔗渣中提取木聚糖不仅变废为宝,还有利于“资源环境友好型”社会的建设,具有很高的经济效益和社会效益。 响应面分析法(Response Surface Analysis,RSA)是由Box等人于20世纪50年代提出的一种优化工艺条件的有效方法。它不同于正交实验等点对点的优化,而是以回归方法作为函数估算的工具,将多因子实验中因子与实验结果的相互关系,用多项式近似,把因子与实验结果(响应值)的关系函数化,依此可对函数的响应值进行分析,研究因子与响应值之间、因子与因子之间的相互关系及其主效应和交互效应,并进行优化。本实验应用Design-Expert 7.1.6软件系统对实验数据进行统计分析,拟合曲线,建立数学模型,利用其提供的三维立体图形,观察响应曲面,进一步对实验条件参数进行优化。 1 材料和方法 1.1 仪器和试剂 甘蔗渣,取自云南省红河州弥勒县朋普糖厂;D(+)木糖、氢氧化钠、3,5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、苯酚、亚硫酸钠、盐酸均为国产分析纯试剂;722S可见分光光度计,上海菁华科技仪器有限公司;水流真空泵,上海爱朗仪器有限公司。 1.2 甘蔗渣的预处理 用亚氯酸钠法对甘蔗渣进行脱木质素预处理,使其木素含量在2%～4%,粉碎过40目筛备用。 1.3 标准木材糖曲线的制作 用DNS法制作木糖标准曲线并计算出标准方程。 1.4 蔗渣糖浓度的测定 用亚氯酸钠和冰乙酸对甘蔗渣预处理→打磨粉碎(过40目筛)→称取一定量的过40目的蔗渣,加入NaOH抽提→抽滤(取滤液)→中和(pH7.0)→定容→酸水解(酸浓度为3mol/L,沸水浴40min)→中和(pH7.0)→定容→显色(沸水浴5min)→测定糖浓度(DNS法)。 1.5 不同的抽提时间和固液比对木聚糖提取率的影响 分别考查温度为室温(20℃)、40℃、60℃、80℃,抽提时间为2 h、4h、6 h、8 h,固液比为1:15、1:30、1:45、1:60,NaOH浓度为6%、8%、10%、12%条件下,对木聚糖提取率的影响。 1.6 最佳提取工艺条件的验证 在单因素实验的基础上,确定各因素的最佳用量范围,设计抽提时间、固液比和NaOH浓度3因素3水平的响应面实验,并且在分析得到的最佳提取工艺条件下,做4组平行实验验证响应面分析方法的可靠性。 1.7 还原糖含量计算 采用DNS法测定出540nm处的吸光值,代入标准方程,计算出还原糖含量,其中: 木聚糖含量=还原糖含量×稀释倍数×0.88 木聚糖提取率=总木聚糖含量/绝干料量×100% 2 结果分析 2.1 单因素对木聚糖提取率的影响 2.1.1 反应温度对木聚糖提取率的影响 固定抽提时间为6h,固液比1:30,NaOH浓度10%,测定在此条件下,抽提温度对木聚糖提取率的影响。 由图1可以看出,在此实验条件下,随着温度的升高,木聚糖的提取率呈逐渐下降趋势,造成此结果的原因可能是由于温度的升高破坏了甘蔗渣中的碳水化合物的结构。当温度高于60℃时,提取率又出现回升,造成此现象的原因尚不清楚。在实际生产中,为了降低生产成本,故选取室温条件。 2.1.2 反应前后木聚糖提取率的变化 室温条件下,固定固液比1:30,NaOH浓度10%,测定在此条件下,不同的抽提时间对木聚糖提取率的影响。 由图2可以看出,在此实验条件下,木聚糖提取率随着时间的延长先呈明显的上升趋势,而后急速下降,随后又缓慢上升。这是因为在反应开始后,甘蔗渣中的纤维素和半纤维素迅速溶出,经水解生成可溶性木糖和低聚木糖,使溶液中的糖组分迅速增大;当反应继续进行时,部分木聚糖降解导致提取率下降,最后则可能是由于木糖和低聚木糖之间的相互转化,使得溶液中糖的聚合度的变化而引起木聚糖提取率的波动变化。综合各方面因素考虑,实验选取抽提时间为4 h。 2.1.3 固液比对提取率的影响 室温条件下,固定抽提时间为4 h,NaOH浓度10%,此条件下,测定不同固液比对木聚糖提取率的影响。 由图3可以看出,在一定变化范围内,木聚糖提取率随着固液比的增加而升高,在1:45处达到最大值,而后随着固液比的进一步增大而呈缓慢下降趋势。这主要是因为在一定范围内,固液比越高,单位料样所接触到的提取液的有效面