cab反胶束中木素过氧化物酶lip不能表现活力的原因分析.docxVIP

cab反胶束中木素过氧化物酶lip不能表现活力的原因分析 胶蜀酶是20世纪80年代发展起来的跨学科交叉研究领域。主要研究反胶束酶的催化剂性能，探索其潜在应用[1.4]。1983年，在一些白腐菌（如phan箭科）中发现了一种含有血液的过敏酶，它对天然高聚物素和小分子环境污染物的生物降解起到了重要作用[7.14]。因此，lip的诱导性能和机制研究对充分利用自然资源、保护生态环境、水和土壤的生物修复和可持续发展具有重要意义。迄今为止，lip的研究主要集中在传统的水介质中[15.17]。近年来，人们研究了lip在反凝胶介质中的催化剂性能，并对其用于多孔芳酸根分解的应用潜力进行了研究。在这项研究中，我们发现，在含有乙醇的16烷基-甲基氧化物（ctag）的反聚束中，lip不能发挥任何作用，但液体介质中的高浓度ctag对lip的诱导活动没有影响。为了阐明乙醇的作用，我们研究了不同碳链长度的乙醇对lip酶催化性能的影响。 1 实验部分 1.1 月桂醇聚氧乙烯醚引领下的生物基苯磺酸钠aol 岛津UV 240型紫外可见分光光度计(日本Shimadzu公司)及其恒温附件;HZS-H型恒温水浴振荡器(哈尔滨东联电子技术开发有限公司). 月桂醇聚氧乙烯醚(Brij 30)、琥珀酸二辛酯磺酸钠(AOT)购自Sigma公司;藜芦醇(VA)购自Fluka公司,溴化十六烷基三甲铵(CTAB)、H2O2、异辛烷、环己烷、柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸氢二钠、丁醇、戊醇、己醇、辛醇、正十二醇等均为国产分析纯试剂,水为三蒸水. 1.2 反胶束体系的合成 在小锥形瓶中加入一定体积的异辛烷或环己烷,按所需表面活性剂浓度称取一定质量的某表面活性剂于锥形瓶中,再加入一定体积某p H缓冲液(缓冲液的体积等于按给定水与表面活性剂摩尔比(ω0)计算所得的总水体积减去酶液和用于引发酶促反应所需的H2O2水溶液体积),CTAB体系还需要加入一定量的短碳链醇作助表面活性剂,振荡片刻,即形成澄清、透明的反胶束体系. 1.3 由木素氧化酶lip生产 产木素过氧化物酶的菌种、培养条件及其酶的分离纯化同文献. 1.4 反胶束总体积l-1h2-1h2l-1h2-1h21e评分的测定 直接称取一定量的底物藜芦醇(VA)溶于上述反胶束体系中,再依据所需浓度加入一定量的直链醇(文中物质浓度都是基于反胶束总体积的值),摇匀后,取一定体积于石英比色皿中,加入一定体积Li P酶液并摇匀在某温度下预热2 min后,以10 mmol·L-1H2O2溶液引发,在分光光度计上记录310 nm处吸光度(A)随时间(t)变化的曲线. 2 ctab反胶束与高效醇作用的关系 藜芦醇是木素过氧化物酶的最适底物,文中所示Li P的催化活力均为其在过氧化氢存在下对VA的氧化初速率.VA的氧化产物为藜芦醛,它在310 nm处有较强的光吸收. 以往研究中,我们对常见的不同类型的表面活性剂形成的胶束和反胶束中木素过氧化物酶(Li P)的催化性能进行了较为深入系统的研究,发现Li P的催化活力不仅与表面活性剂的类型有关,还与表面活性剂聚集体结构有关(另文报道).在水介质中CTAB对Li P的催化活性影响不是很大,然而在CTAB/醇/异辛烷/水反胶束中Li P却表现不出活力.我们曾尝试改变体系的ω0,水相pH,CTAB浓度和醇的种类(n=4,5,6,8,12,n为直链醇的链长),结果均未发现Li P在其中有明显活力. 为了揭示其中醇的影响(CTAB必须在有助表面活性剂的条件下才能形成反胶束,短碳链的醇是常用的一类助表面活性剂),本文就不同碳链长度的醇对Li P酶催化性能的影响进行了研究.由于CTAB反胶束体系中醇浓度较高,且碳原子数大于4的直链醇在水中的溶解度又很小,为此采用了Li P可在其中显示催化活力的CTAB正胶束、AOT反胶束和Brij30反胶束作介质,通过研究这些介质中不同链长的醇对Li P催化活力的影响,来探讨CTAB反胶束中木素过氧化物酶(Li P)不能表现活力的原因. 表1和表2给出了在CTAB正胶束和AOT反胶束中不同链长和浓度醇存在下Li P的催化活力.由表1,2可见,无论是在CTAB正胶束还是AOT反胶束中,低浓度的醇对Li P都表现出一定的激活作用,而高浓度的醇对Li P却都表现出一定的抑制作用.在CTAB正胶束中由于醇溶解度的限制,没有得到使Li P完全失活的醇浓度.在AOT反胶束中除丁醇外(需超过1200 mmol·L-1)其余醇都在500 mmol·L-1以下便可使Li P酶完全丧失活力.由于形成澄清、透明的CTAB反胶束所需助表面活性剂醇的浓度通常超过500 mmol·L-1,因此,推测高浓度醇对Li P的失活作用是Li P在CTAB反胶束中不能体现活力的主要原因. 在上述研究中虽考虑了表面活性剂聚集体结构的影响