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hplc法测定独一则颗粒中木草素的含量 单味针（无糖）是在提取和其他过程中由独裁者phollomathe产品的提取而成的中药产品。具有活血、镇痛、活血化瘀、止血于血液抑制等功效。独一味中的主要化学成分为黄酮类化合物:木樨草素, 有木樨草素?- 7 -?O?-?葡萄糖苷、芹菜素?- 7 -?O?-?新橙皮糖苷、槲皮素和槲皮素?- 3 -?O?-?阿拉伯糖苷。本品水解后的主要黄酮苷元为木樨草素, 是独一味中的主要化学成分。为了控制独一味颗粒的内在质量, 我们采用HPLC法, 对其制剂中所含的主要成分木樨草素进行了含量测定研究, 取得了较为满意的结果, 可作为独一味颗粒的主要质量控制指标之一。 1 仪器和试剂盒 1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪:1525泵, 2487双通道紫外检测器, Waters柱温箱, Empower液相色谱工作站。 1.2 含量测定 木樨草素对照品 (批号:111520-200201) , 供含量测定用, 购自中国药品生物制品检定所。甲醇为美国Tedia色谱纯, 水为超纯水, 其它试剂均为分析纯。 2 方法和结果 2.1 流动相及柱温度 参照银杏黄酮含量测定的色谱条件。 色谱柱:PhenomenexLuna C18, 4.6mm×250 mm, 5 μm;柱温:30℃;流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液 (50∶50) ;检测波长为350 nm;流速:1.0 mL/min。 2.2 检测波长的选择 取木樨草素对照品溶液, 在200~400 nm范围内扫描, 结果在350 nm处有最大吸收, 故选择350 nm作为检测波长。 2.3 供试品溶液的制备 取本品, 研细, 称取1.002 0 g, 置锥形瓶中, 加甲醇25.0 mL, 称定重量, 超声提取30 min, 取出, 放冷, 甲醇补足失重, 滤过, 取续滤液10.0 mL, 置烧瓶中, 加盐酸2.9 mL, 90℃水浴回流30 min, 取出, 放冷, 转移至25 mL量瓶中, 用甲醇稀释至刻度, 摇匀, 用微孔滤膜 (0.45 μm) 滤过, 取滤液为供试品溶液。 2.4 对照溶液的制备 取木樨草素适量, 加甲醇制成每1 mL含10 μg的溶液, 作为对照品溶液。 2.5 空白溶液测定 按处方中辅料的比例, 制备不含独一味的空白制剂, 按正文方法制成空白溶液, 依法测定, 结果空白溶液在与木樨草素对照品相同保留时间处未见色谱峰, 表明其它成分及辅料无干扰。 2.6 标准曲线及线性回归分析 精密吸取上述对照品溶液 (0.010 58 mg/mL) 4, 8, 12, 16, 20 μL, 注入液相色谱仪, 测定峰面积, 以对照品的进样量 (μg) 为横坐标, 以峰面积为纵坐标, 进行线性回归, 得回归方程 (n=5) :Y=4.106×106X-16 281.947,r=0.999 97。线性范围0.042 32~0.211 6 μg。 2.7 进样稳定性试验 精密吸取上述对照品溶液10 μL, 分别在0, 2, 4, 8, 24 h进样, 测定木樨草素的峰面积, 结果表明24小时内测定结果稳定。 2.8 精密度测试 精密吸取上述对照品溶液10 μL, 注入液相色谱仪, 测定木樨草素的峰面积, 重复进样5次,RSD为0.56%。 2.9 平均含量和rsd 照含量测定项下操作, 对同一批号 (批号 020504) 样品5份进行测定, 结果平均含量为0.369 mg/g, RSD为1.94%。 2.10 加样回收及加标回收率 用加样回收, 精密称取已知木樨草素含量的同一批号 (批号 020504) 的样品约0.6 g, 共6份, 分别精密加入木樨草素对照品溶液 (0.200 2 mg/mL) 一定量, 照含量测定项下操作, 平均回收率98.23%,RSD为1.33%。 2.11 样品中木草素的含量测定 测定了10批样品中木樨草素的含量, 结果见表1。 3 结论和讨论 本法测定独一味颗粒中木樨草素的含量, 方法简便, 重现性好, 专属性强, 可作为独一味颗粒的质量控制指标。