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s萘普生分子印迹聚合物的合成与结构表征 分子印花技术是一种新型有效的分离技术，旨在模拟生物内的抗体、酶或酶与底物之间的专一性相互作用而发展的。分子印花聚合物是由该技术制备的具有特定识别功能的高聚物。通过将高聚物分子整合到聚合物分子（测量或分离的分子）、功能单体、交联剂和可能的固状材料后，对模型分子进行清洗、去除，然后获得模型分子。聚合物中模型分子留下的空孔和空孔中的活性基团与模型分子的形状和官能团是互补的。即使是难以分离的异构体，也可以进行分析和分离。作为一种高选择性分子分子，该算法在分子识别和生物医学技术的免疫分析中具有良好的应用前景，引起了人们的关注。 萘普生(2-(6-甲氧基-2-萘基)-丙酸),为2-芳基丙酸类药物,是解热、镇痛、消炎抗风湿的基本药物,其中α位为手性碳原子,因此存在一对光学活性对映体.临床研究表明,萘普生S-(+)-构型的药效为R-(-)-构型的28倍.为了减少用药量及避免对人体的毒副作用,萘普生将被要求逐渐以纯对映异构体形式上市,这对萘普生的拆分及检测提出了较高要求.本文以丙烯酰胺为功能单体合成了(S)-萘普生分子印迹聚合物(molecularly imprinted polymer,MIP),研究其对(S)-萘普生的识别特性.分析了不同浓度的功能单体丙烯酰胺对(S)-萘普生的紫外吸收光谱的影响,为MIP的制备提供依据.模板分子与功能单体的复合物的分子结构用Hyperchem软件进行模拟,并计算其结合能.检测了分子印迹聚合物对模板分子(S)-萘普生及其对映异构体(R)-萘普生的选择性结合能力,并计算了分离因子α.用Scatchard分析法评价了MIP的结合等温线,并得到高亲和力和低亲和力的结合位点的离解常数Kd和最大表观结合常数Qmax. 1 实验部分 1.1 -三甲基苯甲酰苯基磷酸乙酯 (S)-萘普生和(R)-萘普生(浙江省天新药物化工有限公司);交联剂二丙烯酸丁二酯(BDDA)及光引发剂2,4,6-三甲基苯甲酰苯基磷酸乙酯(LR 8893X)(德国BASF公司);丙烯酰胺、氯仿、甲醇及乙酸等试剂(上海化工厂). 2201型紫外可见分光光度仪(日本Shimadzu公司);THZ-82型恒温振荡器(江苏太仓实验设备厂); 100CX液氮N2吸附仪(美国OMNISORP公司); Hyperchem 7.0 软件 (Hypercube, Inc). 1.2 功能单体丙烯酰胺的检测 模板分子(S)-萘普生的浓度固定为C0=0.5 mmol/L,加入不同量的功能单体丙烯酰胺(浓度C1分别为0,0.5,1.0,2.0,4.0 mmol/L),在恒温器中振荡12 h后,用相应浓度的丙烯酰胺溶液作为参比液,检测紫外吸收光谱的变化. 1.3 结构模拟和分析方法 因为现代计算方法还难以模拟高度交联的MIP结构,目前主要着重于MIP制备的第1步,即模拟模板分子和功能单体分子形成的复合物.用Hyperchem 7.0模拟此复合物的分子结构.首先分别模拟(S)-萘普生及丙烯酰胺的最低能量构象的分子结构,然后经过系统能量优化得到两者形成复合物的分子结构. 1.4 空白聚合物的制备 取模板分子(S)-萘普生(4 mmol)和功能单体丙烯酰胺(16 mmol)充分溶解于氯仿中,再加入交联剂BDDA(80 mmol)和引发剂LR 8893X(50 mg),通N2,10 min后,于4 ℃,紫外灯光照下聚合48 h,得到白色固状聚合物.用甲醇-乙酸(体积比为8∶2)洗脱聚合物至洗脱液中检测不出模板分子,最后用甲醇洗去残留乙酸,真空干燥至恒重.空白聚合物如上法所制备,只是不加入模板分子. 1.5 复配体分离性测定 取聚合物20.0 mg放入10 mL锥形瓶中,加入2.0 mL已知浓度的(S)-萘普生或其对映异构体(R)-萘普生的氯仿溶液,于室温下在恒温振荡器中振荡24 h.然后将此混合物转入离心机中以10 000 r/min转速离心10 min.用紫外分光光度仪测定(S)-萘普生或其对映异构体的平衡浓度.根据结合前后溶液中浓度的变化计算聚合物对底物的结合量.平行测定3次取平均值.结合分配系数 KD=CpCsΚD=CpCs 式中,Cp为聚合物结合底物的浓度;Cs为溶液中底物的平衡浓度.分离因子α可定义为2种不同底物的结合分配系数之比. 为研究聚合物的结合动力学性质,取50.0 mg聚合物与5.0 mL 的浓度为2.0 mmol/L的(S)-萘普生氯仿溶液混合,在不同的时间分别测定(S)-萘普生在聚合物上的结合量. 2 结果和讨论 2.1 克氏原螯虾c-普生-四氢化反应中金属酶表型的变化 在浓度C0=0.5 mmol/L的(S)-萘普生氯仿溶液中分别加入浓度不同的丙烯酰胺,观察(S)-萘普生的紫外光谱的变化,研究模板分子与单体之间的作用力