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hplc法测定辽东木芽皂苷a的含量 辽东地带（miq.）是五加科木刺槐属植物。它有强烈的苦味、辛味和扁平。具有益气安神、强精补肾、祛风活血、除湿止痛、健胃利尿等功效。用于治疗哮喘、糖尿病、关节炎、肝炎、胃痉挛、气虚和其他疾病。我国从唐代就开始以楤木的根、根皮和叶入药,楤木中主要活性成分为皂苷。作者建立了辽东楤木叶中楤木芽皂苷A含量测定的HPLC法,力求为辽东楤木叶的质量评价提供可靠的依据。 1 主要仪器和试剂 LC-10AT高效液相色谱仪(日本岛津公司),UV检测仪(美国Spectra-Physics公司),DK-98-1水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司),N-1000旋转蒸发仪(上海爱郎仪器有限公司),超声仪(中船七院七二六所超声仪器厂)。 楤木芽皂苷A对照品(自制,纯度质量分数为98.4%),乙腈(色谱纯,美国Tedia 公司),二次蒸馏水、磷酸(分析纯,沈阳化学试剂厂)。 辽东楤木叶药材分别采自长白山及辽宁新宾、清原,由沈阳药科大学中药学院路金才副教授鉴定为辽东楤木(Aralia elata(Miq.)Seem)的叶。 2 方法和结果 2.1 流动相、检测波长 色谱柱:ODS柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水-磷酸(体积比35∶65∶0.2);流速:0.8 mL·min-1;检测波长:206 nm;柱温:28 ℃;进样量:10 μL。 2.2 溶液的制备 2.2.1 对照品溶液的制备 称取楤木芽皂苷A对照品约50 mg,精密称定,置25 mL量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,经0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为对照品溶液,备用。 2.2.2 供试品溶液的制备 称取楤木叶粉末约3 g,精密称定,用100 mL体积分数为80%的甲醇水溶液回流提取3次,每次1 h,合并滤液,减压蒸干,残渣用甲醇定容至50 mL,经0.45 μm微孔滤膜过滤,取续滤液作为供试品溶液,备用。 2.3 标准品溶液的制备 分别精密量取对照品溶液0.3、0.5、1.0、1.5、2.0 mL置10 mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇 匀,得0.06、0.1、0.2、0.3、0.4 g·L-1的系列质量浓度的对照品溶液,分别精密进样测定。以峰面积(A)为纵坐标,质量(m)为横坐标绘制标准曲线。结果表明,楤木芽皂苷A质量在0.6～4.0 μg内与峰面积呈良好的线性关系,回归方程为A=3.941×105m+4.142×102,r=0.999 7(n=5)。 2.4 精密度测试 精密吸取同一份供试品溶液,重复进样5次,测定,记录楤木芽皂苷A的峰面积,按峰面积计算RSD为2.4%(n=5),表明仪器精密度良好。 2.5 重复试验 平行制备5份供试品,分别精密进样测定,按含量计算楤木芽皂苷A的RSD为0.7%(n=5),表明此方法的重复性良好。 2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液,分别于0、4、6、8、12 h精密进样测定,按峰面积计算楤木芽皂苷A的RSD为1.0%(n=5),表明供试品溶液在12 h内较稳定。 2.7 返回率测试 取已知含量(w=0.162%)的供试品适量,精密加入对照品适量,测定,结果见表1。 2.8 木芽皂苷a峰面积测定 按“2.2.2”条方法制备不同产地的3批供试品,每批3份,分别精密进样测定,记录楤木芽皂苷A的峰面积,对照品及供试品色谱图见图1。用外标一点法分别计算含量,结果见表2。 3 提取方法的选择 a.流动相的选择。分别以甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水、乙腈-水-磷酸为流动相比较分离效果。其中乙腈-水-磷酸为流动相时可以达到最佳分离效果,故采用乙腈-水-磷酸为流动相。 b.提取溶剂甲醇体积分数的确定。实验选择甲醇-水系统作为提取溶剂,分别考察了甲醇、体积分数为50%的甲醇、体积分数为80%的甲醇对提取效率的影响。结果表明,用体积分数为80%的甲醇水溶液提取,峰面积最大,含量最高,杂质对分离度干扰小,供试品峰的分离效果好,故选择体积分数为80%的甲醇水溶液为提取溶剂。 c.提取方法的选择。分别考察了超声提取和回流提取两种方法。结果表明,回流提取的效果较好,峰面积较大,含量较高,故选择回流提取方法。 d.提取时间的选择。试验了同一批供试品用体积分数80%的甲醇提取不同时间,分别回流1次1 h;回流2次、每次1 h;回流3次、每次1 h,回流4次、每次1 h。结果表明,回流3次、每次1 h与回流4次、每次1 h测得的峰面积大、含量高,且两者峰面积相当,故选择回流3次、每次1 h的提取方法。 4 木芽皂苷a质量 建立了辽东楤木叶中楤木芽皂苷A含量测定的HPLC法。楤木芽皂苷A质量在0.6～4.0 μg内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为99.6%,RSD为2.9% (n=9)。本实验中所建立的方法可