腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制mTOR信号通路缓解糖尿病大鼠肾脏细胞外基质沉积.docVIP

第44 卷第1期第10页 2015年2月Vol.44 第44 卷第1期第10页 2015年2月 Vol.44 No.1 Feb. P.10 2015 Acta Med Univ Sci Technol Huazhong 腺苷酸活化蛋白激酶通过抑制 mTOR 信号通路 缓解糖尿病大鼠肾脏细胞外基质沉积* 罗 霞， 邓玲艳， 许文娟， 程黎明△ 华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科，武汉 430030 摘要：目的 高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素(streptozocin,STZ) 诱导大鼠糖尿病模型，尾静脉注射人重组腺相 关病毒介导的截断突变型腺苷酸活化蛋白激酶基因 AMPK-CA(AMPKa?312,T172 D),观察 AMPK 基因治疗对糖尿病 大鼠肾脏的保护作用并进行相关机制研究。方法 24只雄性 Wistar大鼠随机分为糖尿病组(n=16) 和普通饮食组(n= 8),糖尿病组以高糖高脂饮食加小剂量STZ 诱导糖尿病模型，8周后再将其随机分为两组，分别经尾静脉导入表达持续 激活型 AMPK-CA 的重组腺相关病毒rAAV2-AMPK-CA 和 rAAV2-GFP 作为对照，观察12周后处死实验动物，留取肾 脏组织。 PAS 染色观察比较各组大鼠肾脏的病理改变，Real-time PCR 法检测各组细胞外基质的 mRNA 水平变化， Western blot 法检测IV型胶原蛋白al(Col4a1)、 腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK) 及磷酸化 AMPK、 磷酸化的乙酰辅酶 A 羧 化酶(p-ACC)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR) 、磷酸化的mTOR 及其下游分子磷酸化水平改变。 结果 与正常对照组(C 组 ) 相比，转染rAAV2-GFP 组 (GFP 组)糖尿病大鼠肾脏内p-AMPK 和 p-ACC 蛋白水平显著降低(均P0.05); 与 rAAV2- GFP 组相比，转染 rAAV2-AMPK-CA 的糖尿病大鼠(CA 组)体内 p-ACC 表达活性显著升高，肾重/体重、肾小球体积、 肾小球系膜基质增生等指标有明显改善，细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、Col4a1、Col4a5 mRNA表达水平，以及 Col4a?、 信号分子p-mTOR、 磷酸化的真核延伸因子激酶2(p-cEF2K) 及磷酸化的起始因子4E 结合蛋白1(p-4EBP1) 蛋白表达水 平显著降低(均 P0.05)。 结论 rAAV2 介导的 AMPK-CA 基因治疗可能通过增加糖尿病大鼠肾脏 AMPK 活性，抑 制 mTOR 信号通路，缓解基质沉积，对糖尿病大鼠肾脏起保护作用。 关键词 ：腺苷酸活化蛋白激酶； 糖尿病肾病； 雷帕霉素靶蛋白 中图分类号：R692.3 DOI:10.3870/j.issn.1672-0741.2015.01.002 AMP-activated Protein Kinase AHleviates the Accumulation of Renal Extracellular Matrix in Diabetic Rats through Inhibiting mTOR Signaling Pathway Luo Xia,Deng Lingyan,Xu Wenjuan et al Department of Laboratory Medicine,Tongji Hospital,Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China Abstract Objective To investigate the protective effect of adenosine 5-monophosphate(AMP)-activated protein kinase (AMPK)on the kidneys of diabetic rats and the involved mechanism after recombinant adeno-associated viruses(rAAVs)enco- ding constitutively active AMPK-CA(AMPKal312,T172 D) were injected into the diabetic rat models(via tail veins