需氧菌与厌氧菌混合感染致糖尿病足一例病原学检测.docVIP

·544 · · 个 案 报 告 · 需氧菌与厌氧菌混合感染致糖尿病足一例病原学检测 陈丽丹，石玉玲，曾兰兰 【关键词】 糖尿病足；气性坏疽；细菌，厌氧；感染 【中图分类号】 R587.29 【文献标识码】 D 【文章编号】1007-9572(2010)02-0544-01 1 病例简介 患者，男，44 岁，有糖尿病病史， 因“右下肢进展性红肿、溃疡、流脓、 坏死伴疼痛1 月”入院。患者于2009年 8月10日左右劳作中被铁片刺伤，足跟 部出现破溃，逐渐形成溃疡，右足肿胀明 显，自行在社区诊所清创，效果不佳，足 跟处脓肿扩大，脓液较多，8月底红肿逐 渐向上蔓延，右下肢外侧皮肤可见皱起、 水疱、破溃伴有坏死表现，散发较浓重的 腥臭味，疼痛加重。9月2日于外院就诊， 入院时下肢红斑肿胀仍未控制，继续向上 蔓延，皮肤表面出现黑色坏死，足底部溃 疡挤压后可见大量气泡溢出，体温升高， 诊断为“右足外伤并产气英膜杆菌感 染”,入院后给予“头孢他定、左氧氟沙 星”抗感染治疗，局部疼痛稍有缓解， 但病情仍继续发展，9月16日转入我院。 查体发现右下肢肿胀明显，右侧足跟处可 见-3.5 cm×3.5 cm的溃疡，边界不清， 有较多稀薄脓液流出，腥臭味明显，挤压 后可见大量气泡溢出。右大腿及小腿可见 皮下气肿，触之可扣及捻发音，从足底至 右侧腰际部均可触及。大腿外侧可见大片 糜烂，其上有2~3处约5cm×5 cm的黑 斑，右下肢触痛明显。入院后测餐后血糖 为30.8 mmol/L, 给予胰岛素静脉滴注， 次日清展空腹血糖降为10.0 mmol/L。 请 骨科、高压氧科及普外科会诊，会诊后均 考虑为“气性坏疽”,建议行手术治疗。 检验科细菌室床边取材，在对伤口进行消 毒后，将棉签钻入伤口取分泌物及时接种 于厌氧血平板、普通血平板、疤肉培养基 等，同时涂片。并取少许分泌物用于荧光 PCR 检测。 2 病原学检测方法 2.1 细菌培养 普通培养及厌氧培养同 时进行，对厌氧培养菌进行两次耐氧实验 确证为专性厌氧菌。需氧菌的鉴定采用法 国梅里埃 VITEK-2 COMPECT 全自动生 化鉴定仪；厌氧菌的鉴定采用梅里埃的 API20A 鉴定条。 2.2 荧光 PCR (1) 从临床标本中提 取 DNA, 制备模板。(2)探针序列为： 作者单位：510010广东省广州市，广州军 区广州总医院检验科 5- [FAM] TCATCATTCAACCAAAG- GAGCAATCC [TAMRA] -3’,引物1序 列为：5- CGCATAACGTTGAAAGATGG -3,引物2序列为：5-CCTTGGTAG- GCCGTTACCC-3。(3)PCR 体系：5 μl 缓冲液；1 μl dNTPs;引物1、2各1μl; 0.6μl探针；0.2 μl Taq 酶 及 2 μl细菌 DNA 模板，无菌双蒸水补足体积25 μl。 (4)Roche Light Cycler 480 全自动荧光定 量PCR 扩增仪，程序：95 ℃ 5 min,95 ℃ 15 s、55℃ 20s、72℃ 20s、 在55℃ 时采集荧光，重复40个循环。阳性对照 为产气荚膜梭菌 ATCC13124; 阴性对照 为大肠埃希菌ATCC25922, 3 检测结果 3.1 革兰染色结果 伤口分泌物涂片镜 检可见大量革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌 及白细胞。普通血平板培养分离到两种阳 性球菌，厌氧血平板培养可见多种细菌生 长，分离纯化并进行耐氧实验(即同时 接种需氧及厌氧血平板)。最终分离到专 性厌氧菌两株，兼性需氧菌两株，经过鉴 定厌氧菌为多毛拟杆菌、消化链球菌；需 氧菌为粪肠球菌和鸟肠球菌。 3.2 综合分析仪器给出的各项数据，设 定合理的阈值和基线 基线选取2~6或 3~7个循环，阈值线选在阴性扩增曲线 的上方。仪器自动生成标准曲线，并计算 出样本的结果。若扩增曲线显示有抬高， CT 值36个循环，认为标本中产气荚膜 梭菌阳性；若扩增曲线无抬高或CT 值 ≥ 36个循环，认为标本中产气荚膜梭菌阴 性。本患者伤口棉拭子及伤口引流液检测 产气荚膜梭菌均为阴性，阳性对照、阴性 对照均在控。 4 讨论 糖尿病足病理基础是糖尿病的神经病 变和血管病变，两者和感染一起决定了糖 尿病足病变的严重程度。而糖尿病足溃疡 的创面中，由于其渗出物中蛋白及糖的含 量高，有利于细菌生长，极易合并感染， 是导致坏疽，继而致残、致死的重要因 素。5%～10%的糖尿病足患者需进行截 肢手术[。气性坏疽常由产气荚膜梭菌 等厌氧菌侵袭伤口，导