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明胶交联反应指标间的相关性研究 储存期间，胶囊会崩溃或溶解。这是胶囊研发和生产中遇到的一个常见问题，引起了国内外制药界的关注。研究认为,软胶囊溶出迟缓主要是由囊壳材料——明胶产生交联反应所致。明胶的氧化及低分子醛类物质是导致交联反应的主要因素。明胶是由胶原蛋白水解而来的多肽片段,其分子中的氨基酸(主要是赖氨酸和精氨酸)所含有的侧链基团,在发生氧化或自氧化反应时形成醛基,促发交联反应,引起明胶结构中的胶原胶束发生变性,使软胶囊难以溶解,溶出时间明显延长。因此明胶的溶出度、平衡膨胀量和内容物含醛量可作为明胶交联反应的指标,而定量测定明胶中氨基酸的含量可以从分子水平反映明胶交联反应程度。 本项目前期通过模拟明胶胶片,研究了环境因素和处方因素对明胶交联反应的影响。考虑到软胶囊中药物成分的影响,尤其是许多中药提取物中含有醛基基团,很容易引发明胶的交联反应,本研究以中药银杏黄酮为模型药物制备软胶囊,考察温度、湿度、光线以及附加剂对囊壳交联反应的影响;采用甲醛处理胶囊壳模拟明胶交联,考察明胶平衡膨胀量、百分溶出量和氨基酸残基含量3种指标之间的相关性;研究软胶囊在加速实验条件下,明胶平衡膨胀量和氨基酸残基含量与崩解时间的相关性;采用差示热扫描法分析明胶结构的变化,探讨软胶囊溶出迟缓形成机理,以正确评价软胶囊质量,指导软胶囊剂的处方工艺设计和贮存条件选择。 吸收法s 仪器与试药752型UV光栅分光光度计(上海分析仪器总厂);ZRS-SG型智能溶出实验仪(天津大学无线电厂);DSC200PC型差示扫描量热仪(德国NETZSCH公司)。明胶(青海明胶股份有限公司);聚乙二醇400(PEG400)(中国医药集团上海化学试剂公司);Folin-酚试液(北京欣经科生物技术公司);三硝基苯磺酸(TNBS)溶液(5%,Sigma公司);甲醛原液(37.32%,中国上海化学试剂研究所),银杏黄酮软胶囊(中国药科大学药物制剂研究所提供,主要成分为:银杏黄酮、明胶、甘油等)。 明胶平衡膨胀量测定明胶有限溶胀过程符合以下二级动力学方程式: dsdt=k(Seq-S)2(1) 式中:ds/dt为某一时间的溶胀速率;k为溶胀速率常数;Seq为平衡膨胀量;S为膨胀率,其计算方法为:S=Ws-WiWi,其中Ws为该胶片t时间时的重量;Wi为胶皮初始干重量。公式(1)积分并经数学简化后得: ts=A+Bt(2) 其中A=1kSeq2;B=1Seq。由公式(2)可知,Seq的值可由t/s-t直线的斜率B确定。 将银杏黄酮软胶囊沿中缝切开,挤出内容物,用无水乙醇洗涤3次,室温下干燥至囊壳含水量10%左右。取6粒囊壳分别标号,精密称重,置于蒸馏水500mL中进行溶胀,于1,2,2.5,3,3.5和4h取出囊壳擦干,精密称重。另取6粒于105 ℃烘干至恒重,求出胶囊壳初始干重,计算不同时间点囊壳的S值。按公式(2)回归计算Seq。 明胶溶出实验明胶含量测定采用Folin-酚法,标准曲线方程为:A=0.001 5C+0.007 9(r=0.999 2),其中,C为明胶蛋白质的浓度。 按上述方法将去除内容物、洗涤并干燥的银杏黄酮软胶囊壳进行溶出实验。溶出条件:37 ℃,100r·min-1,以蒸馏水为介质,30min取样(为空白胶囊壳完全溶解的时间)。 明胶氨基酸含量测定按上述方法将去除内容物,洗涤并干燥的软胶囊壳粉碎,称取粉末11mg浸入4%NaHCO31mL与0.5%三硝基苯磺酸(TNBS) 1mL的混合溶液中,40 ℃保温4h,然后加入6mol·L-1HCl3mL,于120 ℃,1.1kPa下加热1h,所得溶液用水5mL稀释,乙醚萃取3次。吸取水相5mL,热水浴加热15min,冷至室温,加水15mL稀释后以空白溶液为对照于346nm下测定吸收值A。空白溶液制备时需在加入TNBS溶液前加入HCl,其余步骤同前。所得吸收值按下式处理: ε-氨基酸残基含量(Y)=mA 其中,A为吸收度,m为公式简化常数,在光通路为1cm,样品重量为11mg时其值为1.830 2×10-4。 甲醛对明胶平衡膨胀量、溶出速率及氨基酸含量的影响配制质量浓度分别为0,2.75,3.68,4.59,5.51,7.35和8.26mg·mL-1甲醛溶液200mL,取空白软胶囊壳6×5粒分别于不同浓度甲醛溶液中浸泡15min,取出擦干。按上述方法分别进行溶出、溶胀等实验,测定明胶平衡膨胀量、溶出百分率和氨基酸残基量,考察三者之间的相关性。 温度、湿度和光线对交联反应的影响按市售包装将银杏黄酮软胶囊在不同温度、湿度和光线条件下贮存3个月,定时取样,测定胶囊壳的Seq值。 附加剂对明胶平衡膨胀量和崩解时间的影响在原软胶囊囊壳配方中加入不同附加剂制备软胶囊,在40 ℃,RH75%条件下放置3个月,定时取样,测定明胶胶壳的S