第二章预处理及固液分离技术详解.pptVIP

影响破碎细胞的因素： 振幅：直接与声能有关，影响比速率k 粘度：影响能耗，并抑制空穴现象 表面张力：表面活性剂显著影响声波破碎效率，因起泡使蛋白质变性，空穴清除 悬浮液体体积：大体积需要高的声能 超声波法 当前第30页\共有72页\编于星期三\9点 影响破碎细胞的因素： 加入珠粒体积与直径:加入细小珠粒，利于空穴形成，并有辅助“研磨效应”，提高破碎率。在相同珠粒填充密度下，随珠粒直径变化，k存在最大值。 探头的材料和形状：选择具有良好声学和机械性能并对生物物质无毒的金属材料，如：钛，不锈钢等；探头的振幅与其面积呈反比，小直径探头，声能限制在较小范围内，并且效率低。 细胞悬浮液的流速：流速增加，破碎率低，处理量大 工业未使用，向大量悬浮液通入足够能量，很困难，产热问题。 超声波法 当前第31页\共有72页\编于星期三\9点 机械法破碎细胞的优缺点： 优点： 内含物全部释放 时间短，效率高，成本低 通用性强，适于实验室和工业生产 缺点： 需要高的能量 产生高温，高剪切力，引起产品变性失活 非专一性，碎片分布宽，给分离造成困难 当前第32页\共有72页\编于星期三\9点 渗透压冲击法： 渗透压冲击(Osmotic shock)是在各种 细胞破碎法中最为温和的一种，适用于易 于破碎的细咆，如动物细胞和革兰氏阴 性菌。 四、物理法 当前第33页\共有72页\编于星期三\9点 冻融法： 将细胞急剧冻结后在室温缓慢融化， 此冻结融化操作反复进行多次，使细胞受 到破坏。冻结的作用是破坏细胞膜的琉水 键结构，增加其亲水性和通透性。 另一方面，出于胞内水结晶使胞内外 产生溶液浓度差，在渗透压作用下引起细 胞膨胀而破裂 物理法 当前第34页\共有72页\编于星期三\9点 2.3.2 破碎方法 干燥法： 将细胞用不同的方法干燥（真空、冷冻 、喷雾和气流等），细胞膜结合水丧失，渗 透性发生变化而破裂 缺点：条件变化剧烈，易引起生物物质变性 物理法 当前第35页\共有72页\编于星期三\9点 作用机理：酶溶法(Enzymaticlysis)利用酶反应，分解破坏细胞壁上的特殊键或某种特殊的物质，从而达到破碎细胞壁的目的。 分外加酶法和自溶法两种。 五、酶溶法 当前第36页\共有72页\编于星期三\9点 优点： 产品释放选择性高 抽提速率和收率高 产品破坏少 pH、温度外界条件要求低 不残留细胞碎片 酶溶法 缺点： 费用高 通用性差 存在产品抑制 不适于工业生产 当前第37页\共有72页\编于星期三\9点 应用： 原生质体融合 释放出克隆出的胞内蛋白 制取特殊的壁葡萄糖聚合物 与机械法破碎细胞协同使用 从细胞内不同的位置选择性的释放蛋白 酶溶法 当前第38页\共有72页\编于星期三\9点 作用机理： 用化学试剂溶解细胞壁或抽提细胞中某些组分 处理方法： 表面活性剂；有机溶剂；EDTA螯合剂；变性剂 取决于化学试剂的类型及细胞壁、细胞膜的结构与组成。 六、 化学渗透法 当前第39页\共有72页\编于星期三\9点 优点： 产物释放有一定的 选择性 不需要特殊设备 细胞外形保持完整， 细胞碎片少，浆液粘 度低，利于后续分离 化学渗透法 缺点： 通用性差 时间长，效率低 某些化学试剂有毒 当前第40页\共有72页\编于星期三\9点 比较项目 机械法 非机械法 比较项目 机械法 非机械法 破碎机理 切碎细胞 溶解局部壁膜 效率 效率高 效率低 碎片大小 碎片细小 碎片较大 设备 需专用 设备 不需专 用设备 内含物 释放 全部 部分 通用性 强 差 粘度 高（核酸多） 低（核酸少） 经济 成本低 成本高 时间 时间短 时间长 应用范围 实验室、工业范围 实验室 范围 表2.3 机械破碎法和非机械破碎法的比较 当前第41页\共有72页\编于星期三\9点 破碎技术的选择原则： 目的产物在细胞质中，需机械破碎法 目的产物在细胞膜附近，可采用非机械破碎法 目的产物与细胞膜或细胞壁结合，可采用两种方法结合 处理量的大小，细胞壁的强度和结构，目标产物对破碎条件的敏感性，破碎后固-液分离的难易程度 当前第42页\共有72页\编于星期三\9点 破碎技术的研究发展方向： 多种破碎方法结合 与上游过程结合 1、培养过程控制 2、寄主细胞选择 3、克隆噬菌体溶解基因 4、耐高温产品的基因表达 与下游结合 从后分离过程考察细胞破碎技术 当前第43页\共有72页\编于星期三\9点 第三节 固-液分离技术 ? 固-液分离是指将发酵液