组织DNA的提取与纯化.pptVIP

组织DNA的提取与纯化 讲课内容概述1 试验原则2 实验操作及相关试剂介绍3注意事项4 一、概述DNA在生物组织中以核蛋白的形式存在于细胞核中。单倍体人类DNA平均相对分子量为6×1010 道尔顿，相当于1.3×105kb。 DNA的分类有：真核DNA细菌DNA病毒DNA质粒DNA DNA样品的来源： 组织 – 肝脏、赘生物、肌肉、培养细胞 血液 细菌 – 培养细菌、质粒 二、实验原则 保证DNA一级结构的完整性 排出其他干扰性分子的污染 干扰分子 对酶有抑制作用的物质 样品中存在的其他生物大分子有机溶剂、高浓度的金属离子等蛋白质、多糖和脂类应尽量将此类物质的浓度降低到最小程度 相应抽提对象之外的核酸污染DNA抽提时，应避免RNA干扰 相关因素对于核酸的影响：机械剪切力、高温剧热环境过酸、过碱的反应体系各种核酸酶降解效应物理因素化学因素生物因素操作轻柔，切忌剧烈混匀、震荡；控制实验温度pH 4~10EDTA缓冲液 避免干扰因素的解决方法 简化操作步骤，缩短提取过程，减少各类因素对核酸的降解。 三、实验操作及相关试剂介绍【实验方法】 物理方式：玻璃珠法 超声波法 研磨法 冻融法 化学方式：异硫氰酸胍法