葛仙米的生长与形态结构的变化.docxVIP

葛仙米的生长与形态结构的变化 葛仙米是绿藻科的一种低水平多细胞蓝藻。原名为卡盘状甲状腺素，属水提取物。葛仙米是以东晋炼丹术家、医学家、道教理论家葛洪的名字而得名。它与地木耳(Nostoc communevanch.),发菜(Nostoc flagelliforme Bornet Flah.)为同属植物,其出现时间早于螺旋藻(Spirulinaprincepts)。葛仙米是我国传统出口的一种珍贵野生的食药两用蓝藻。根据《本草纲目》等记载,葛仙米有治疗夜盲症,脱肛,烫伤和兼具美容之功效。据研究,葛仙米不仅蛋白质含量高,蛋白质中的氨基酸品种齐全,结构合理,基本符合FAO/WHO专家委员会于1973 年推普的人体必需氨基酸模式,蛋白质质量好,营养价值高为优质蛋白质,而且,葛仙米还富含多糖和具有特殊的保健功能的维生素C、B族维生素、β-胡萝卜素、微量元素等营养成分。湖北省恩施地区是我国葛仙米主要原产地,近年来,由于各种原因导致葛仙米产量大大降低,其主要原因有二个:一是农民不施农家肥而改施化肥,严重污染了土壤,如碳铵等肥料改变了土壤的酸碱性;二是大量使用除草剂,改变了葛仙米赖以生存的生长环境。由于以上原因造成了葛仙米自然资源短缺,甚至有绝迹的可能。因此,进行葛仙米的人工培养技术的研究,具有重大的理论和现实经济意义。 葛仙米的人工培养技术已基本成熟,但是对其自然温度条件下的人工粗放培养还没有积累数据。本研究于2008年春季在实验室自然温度条件下对葛仙米进行培养,运用BG110培养基,初步观察和探讨其生长生理特性及形态结构特征,为今后进一步改良其培养方法提供一定依据。 1 材料和方法 1.1 实验材料 葛仙米藻种由中国科学院水生生物研究所提供。 1.2 藻种的接种 显微镜、灭菌锅、光照培养箱、电子天平。 采用固体培养藻种和自然温度条件下液体培养两种培养方式,其中液体培养的藻种来自固体培养(固体藻种培养15d左右后观察到有球体产生即可用于液体培养藻种),接种过程采用无菌操作。两种培养方式的条件如下:固体培养:干藻种复水后,碾磨接种于BG110固体培养基中,于光照培养箱中培养,培养温度为25℃、光照强度为35μmol m-2·s-1～40μmol m- 2·s-1、光暗周期比为14∶10(h).自然温度条件下液体培养:将葛仙米固体培养藻种接种于BG110液体培养基中,在2008年春季自然温度条件下,光照强度为70μmol m-2·s-1～80μmol m-2·s-1,24h光照下通气培养,每9d 更换一次培养基,实验观测的培养周期为36d。 1.4 比生长率的计算 每9d测一次藻体的生物量(即鲜重),然后测定其生长曲线。以公式μ=(lgN-lgN0)/(t-t0) 计算比生长率,公式中N、N0分别表示培养终止和起始时的生物量,t、t0分别表示培养终止与起始时间。 1.5 形态观察 每天肉眼观察葛仙米外部形态及其颜色变化,培养第30d显微观察藻体形态结构变化。 2 结果与分析 2.1 液体培养的葛仙米形态特征 两种培养方式的生长情况见图1、图 2。图2与图3比较,在春季自然温度条件下液体培养的葛仙米形态特征与天然野生的葛仙米形态特征基本一致。本研究实验条件与文献中培养条件有所不同,培养温度为春季自然温度条件;而模拟自然状态下葛仙米的人工培养,培养温度采用25℃恒温,光照条件较强烈,培养液更换周期较短。 2.2 葛仙米生长情况 在春季自然温度条件下培养葛仙米的生长曲线见图4,葛仙米生长速度较快,最大比生长率出现在第九天,而且生长曲线符合对数生长曲线。更换培养基促进了葛仙米的生长,葛仙米的生长态势良好。 2.3 多联体的变色 液体培养初期球体不明显,显绿色;15d后开始出现明显的球体并开始出现多联体,颜色加深逐渐变成深绿色;25d后大量出现多联体与较微小的球体,颜色进一步加深变成褐色。液体培养30d后镜检与初始培养藻种镜检结果分别见图5和图6,葛仙米从形态结构上看与藻种基本相同,异形胞明显。 3 措施二:自然温度条件下,葛仙米生长情况 研究方式采用固体培养及春季自然温度条件下液体培养两种方式。葛仙米为蓝藻门念珠藻属的一种具有自养固氮能力的微生物,其它异养菌类很难从葛仙米培养基获得营养物质,葛仙米能在半无菌状态下生长。葛仙米在丝状体上相隔一定距离可产生异形胞,在两个异形胞之间,或者由于丝状体某些细胞的死亡,将丝状体分成许多小段,每一小段即形成一个藻殖段,藻殖段经过细胞分裂增加长度进而发育成成熟的藻丝体。春季自然温度条件培养的葛仙米起始的颜色一般为深绿色,培养一段时间后球体很快呈现褐色,这与严格实验控制条件只为深绿色明显是不同的,而与自然条件却十分相似都为褐色。主要原因可能是球体生物量积累到一定程度后并且受到这个适合其生长的变化的温度而综合的表现出来的一