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促排卵因子在动物输卵管中的作用 动物和动物的卵由一些复杂的神经分泌机制决定，包括繁殖器官和大脑之间的信号通道。在自发性排卵的动物中(人、羊、牛和鼠等),一个成熟卵巢卵泡所分泌的雌激素触发了下丘脑Gn RH的释放;而在诱导性排卵的动物中(兔、猫和骆驼等),性交相关因子负责触发Gn RH的释放。 Adams et al研究发现:精浆中含有促进排卵的因子。精浆中促排卵因子(OIF)的发现改变了长久以来形成的关于控制排卵级联的观点。哺乳动物精液中OIF所起的未知生物学功能可能在将来雄性和雌性不孕症的诊断中起到重要的作用,在治疗不孕症新药的开发中也拥有很强的发展潜力。 本文将从以下5个方面对精液中的OIF进行阐述:OIF的发现、OIF的作用及其通路、OIF的生化分离和提纯、与剂量相关的OIF反应及其作用机理、不同畜种间OIF的存在。 1 非人体交配条件对睾丸的影响 第一次直接证明精液中存在一种OIF的发现是来自于中国的科学研究,他们认为在双驼骆驼中,精液中的一些因子负责激发排卵而不是来自于交配的机械刺激。当给雌性双驼骆驼的阴道内或者肌内/宫内注射双驼精浆后排卵发生。在早期1970年Fernandez-Baca et al对羊驼、驼马和新世界血缘相关骆驼的研究发现,自然体内交配后95%以上的雌性发生排卵,相反没有体内交配则只有14%以下的雌性发生排卵。由此早期的学者认为:在羊驼和驼马中,交配过程中生殖器的物理刺激是促排卵的主要触发因素。但是,早期的研究并没有去设计控制潜在的可能影响排卵的混杂因素(如人工授精过程中也有对生殖器的物理刺激)。与此前研究明显相反的是,1994年Sumar的研究则发现只有6/10的羊驼和5/8的驼马在人工授精(阴道内注射羊驼精液)后发生排卵。此后的研究则更加注意去设计控制其它的潜在因素,并已经采用肌内注射精浆来规避对阴道、子宫颈和子宫的物理刺激。 OIF在双驼骆驼上的原始发现在将近20年间未被广泛关注,一直到2005年间Adams et a在羊驼和驼马上一系列的研究才明确了精浆对排卵的作用。对羊驼和驼马进行单独的精浆肌注(1/4排出),促发了90%以上的雌性发生排卵。精浆中OIF的作用主要发现于诱发性排卵动物中,因为没有自发性排卵的混杂影响可以更清楚地研究影响排卵发生的因素。但是,研究表明:精浆中的OIF同时出现在诱导性和自发性排卵的动物中。 2 精浆与gnrh的关系 一系列羊驼和驼马的肌内注射和宫内注射精浆试验检验了精浆对同种母畜促排卵的影响及其作用通路。在以上试验中,当1个≥8 mm的生长卵泡被观测到时(即排卵可能存在时)才进行注射试验。4次以上的重复试验观察到的结果是:肌内注射精浆组的排卵率达到94%(33/35),而生理盐水注射组排卵率为0%;宫内注射精浆组的排卵率为39%(17/44),而生理盐水组排卵率为0%。精浆注射后的29.3±0.7 h内每个4小时进行一次排卵的超声检测(自然交配、Gn RH处理和LH处理后排卵的间隔期分别为30.0±0.5 h、29.3±0.6 h和29.3±0.7 h)。 但是,12只母羊驼在子宫颈注射精浆后并没有观察到排卵。之后的研究如Ratto et al、Silva et al、Tanco et al认为,这有可能是生殖器粘膜层减弱了OIF的吸收。与之相对应的是,羊驼和驼马的交配是一个较长的过程(30~50 min),而精液是子宫内被排出。经子宫内膜刮除后的羊驼再进行子宫内精浆注射提高了排卵反应,由此认为OIF是通过一个系统而并不是由一个局部通路发挥作用的。精浆经肌内注射、子宫内膜刮除后宫内注射和非刮除术宫内注射所引起的排卵率分别为93%、67%和24%。根据以上结果,实验人员认为:在自然状态下的自然交配过程中,母畜对精浆中OIF的吸收是通过表皮脱落的子宫内膜充血协助完成的。 为了进一步测定精浆处理后的促排卵是否经排卵前的LH峰一起发挥作用,驼马的血样在精浆处理后8小时被采集并分析。精浆处理后驼马和双驼骆驼的LH峰到来的时间和自然交配是相近的(处理后0.5 h之内,最久不超过2 h),而且LH峰延续的时间比Gn RH处理后的要长,LH浓度在处理后8 h还未回归到正常浓度。 精浆对引起黄体的作用并没有促排卵的作用明显。与Gn RH促排卵相比,精浆促排卵形成的黄体更大,退化更晚,并且形成2倍多的孕酮。由于LH峰和黄体形成及作用存在正相关,因此精浆与Gn RH处理的对比试验说明精浆中OIF的促黄作用是由LH所介导的。通过使用驼马分离和纯化的OIF的进一步试验也已经表明精浆具有促LH释放和促黄作用。 3 ratchetal试验 此前已经尝试利用阴离子交换法和疏水层析法去分离和提纯骆驼精浆中的OIF[10~12],但是这些方法缺少一种生物验证方法去数量化的检测细胞碎片的影响,因