大枣不同炮制品的薄层色谱研究.docxVIP

? ? 大枣不同炮制品的薄层色谱研究* ? ? 刘世军，帕合热叶·卡哈尔，张 娱 陕西中医药大学/陕西省中药资源产业化协同创新中心/秦药特色资源研究开发国家重点实验室（培育）/陕西省创新药物研究中心，陕西 咸阳 712083 大枣为鼠李科植物枣Ziziphus jujubaMill.的干燥成熟果实［1］。具有补中益气、养血安神、缓和药性等功效［2］。现代药理学研究表明，大枣具有抑制肿瘤、抗氧化、保肝、抗过敏、增强肌力、镇静、抗压、抗衰老等作用［3-5］。大枣中所含的环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate, cAMP)和环磷酸鸟苷（cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）活性成分有抑菌保肝、抗心律失常、降低血糖和血清胆固醇［5］等作用。 现代研究表明，大枣含有多种有效成分。例如，大枣果实含有生物碱：光千金藤碱、吡咯烷生物碱、巴婆碱；三萜酸类：白桦酯酸、齐墩果酸、马斯里酸（山楂酸）；皂苷类：大枣皂苷、酸枣皂苷；黄酮类：芸香苷（芦丁）；脂肪酸：油酸［6］等。2015 版《中华人民共和国药典》以齐墩果酸、白桦酯酸为对照控制大枣质量。大枣因产地、生长环境和采摘条件的不同，其化学成分会发生一定变化。本试验采用薄层色谱法（TLC）对大枣中的三萜类成分白桦酯酸、齐墩果酸和其他成分进行色谱分析，探索大枣的炮制原理。 1 材料 1.1 仪器C21-HT2109 型多功能电磁炉（广东美的生活电器制造有限公司）；WF-H201B 紫外透射反射仪（上海精科实业有限公司）；KQ3-00DE 型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公祠）；100×100 双槽层析缸、硅胶G 薄层板（青岛海浪硅胶干燥剂有限公司）。 1.2 材料大枣（新疆大枣，产地新疆托克逊），白桦酯酸（陕西乐博生化科技有限公司，批号，齐墩果酸（陕西乐博生化科技有限公司，批号，石油醚（60～90℃，天津市天力化学试剂有限公司），甲苯（洛阳昊华化学试剂有限公司），乙酸乙酯（天津市天力化学试剂有限公司），冰醋酸（天津市天力化学试剂有限公司），甲酸（天津市科密欧化学试剂有限公司），三氯甲烷（成都市科隆化学品有限公司），丙酮（成都市科隆化学品有限公司）。 2 方法与结果 2.1 大枣炮制品的制备按《中药大辞典》［6］中大枣的炮制方法，自制不同时间下大枣的清蒸炮制品。取大枣洗净，置蒸笼内，加热蒸制，取出干燥。见表1。 表1 大枣样品炮制方法与性状观察 2.2 对照品溶液的制备精密称取白桦酯酸0.0100g，齐墩果酸0.0100 g，各加乙醇10 mL，超声处理30 min制成1 mL含1 mg的对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 2.3.1 供试品1 的制备 取大枣生品1.0134 g，清蒸（15 min）1.0186 g，清蒸（30 min）1.0055 g，清蒸（45 min）1.0113 g，清蒸（60 min）1.0734 g，各加石油醚10 mL，浸泡10 min，超声处理15 min，滤过，药渣加无水乙醚10 mL，浸泡1 h，超声处理15 min，滤液浓缩至1 mL。 2.3.2 供试品2 的制备 取大枣生品1.0659 g，清蒸（15 min）1.0754 g，清蒸（30 min）1.0401 g，清蒸（45 min）1.0128 g，清蒸（60 min）1.0661 g，各加水20 mL，超声处理15 min，加盐酸0.7 mL，加热水解1 h，滤过，滤液浓缩至10 mL，用乙酸乙酯振摇提取两次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解。 2.3.3 供试品3 的制备 取大枣生品2.0162 g，清蒸（15 min）2.0148 g，清蒸（30 min）2.0158 g，清蒸（45 min）2.0163 g，清蒸（60 min）2.0129 g，各加甲醇20 mL，浸泡10 min，超声处理15 min，滤过，滤液浓缩至2 mL。 2.4 预试验 2.4.1 供试品1 分别吸取供试品1溶液10 μL，对照品溶液各4 μL，点于薄层板上，展开剂为甲苯∶乙酸乙酯∶冰醋酸，分别按a（14∶3∶0.5）、b（16∶4∶0.5）、c（16∶5∶0.5）3 种比例展开，观察斑点。见图1。 图1 供试品1的薄层色谱图 2.4.2 供试品2 分别吸取供试品2溶液10 μL，分别点于薄层板上，展开剂为三氯甲烷：丙酮，分别按a（8∶0.5）；b（4∶1）；c（10∶0.5）3 种比例展开，观察斑点。见图2。 图2 供试品2的薄层色谱图 2.4.3 供试品3 分别吸取供试品3溶液10 μL，对照品溶液4 μL 分别点于薄层板上、展开剂为石油醚∶乙酸乙酯∶甲酸，分别按a（4∶