大孔吸附树脂纯化艾草总黄酮及其抗氧化活性研究.docxVIP

? ? 大孔吸附树脂纯化艾草总黄酮及其抗氧化活性研究 ? ? 杨宇华，黄艳，郑宝东 （1.武夷学院茶与食品学院，福建武夷山354300；2.福建农林大学食品科学学院，福建福州350002） 艾草（Artemisia argyi），又称遏草、医草、灸草等，是一种药食兼用的草本植物，具有独特的天然生物活性，艾草黄酮即为其天然生物活性成分之一[1-3]。为使艾草黄酮成分能够得到全面开发，本研究在艾草黄酮粗提取的基础上进一步分离纯化，黄酮类化合物分离纯化的方法已比较成熟，如溶剂萃取法、膜分离法、超临界流体萃取法、薄层色谱分离、高效液相色谱分离等，但以上方法各存在不足之处，如纯化成本高、产品纯度低、设备要求较高、生产周期长、难以实现产业化等。 大孔吸附树脂技术因其成本低、选择性好、产品纯度高、树脂可再生、工艺简单利于实现大规模生产等优点[4-6]，近年来被广泛用于中草药活性成分的分离纯化研究。本文开展大孔吸附树脂对艾草总黄酮的吸附纯化研究，比较6种大孔树脂的吸附及解吸性能，筛选出最佳大孔树脂，并利用最佳大孔树脂对艾草总黄酮进行静态及动态吸附纯化研究，确定最佳纯化工艺，以期为艾草总黄酮的高效利用及性质组分鉴定提供相关理论依据。 动物机体代谢过程会产生超氧阴离子自由基（O2-·）、羟基自由基（·OH）、过氧化氢（H2O2）等伤害机体的自由基[7-9]，从而引起蛋白质病变、DNA链断裂、酶失活等，因此，清除体内过多的自由基，对于维持机体健康尤为重要。本文以VC为阳性对照，从总还原力、对羟基自由基（·OH）和二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）、超氧阴离子自由基（O2-·）、清除效果等方面开展艾草总黄酮粗提物及纯化物的体外抗氧化活性研究，以期为艾草黄酮类化合物作为天然抗氧剂的开发利用提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 芦丁标准品：成都西亚试剂有限公司；DPPH：Sigma公司；过硫酸钾、水杨酸、氯化铁、硫酸亚铁、铁氰化钾、三氯乙酸、三羟甲基氨基甲烷（分析纯）：国药集团化学试剂有限公司。HP-20型树脂：非极性，比表面积（m2/g）500～550；ADS 17 型树脂：中极性，比表面积（m2/g）90～150；DM-301型树脂：弱极性，比表面积（m2/g）≥330；HPD500 型树脂：弱极性，比表面积（m2/g）500～550；AB-8 型树脂：弱极性，比表面积（m2/g）≥400；D101 型树脂：非极性，比表面积（m2/g）≥550。 1.2 仪器与设备 TGL-16G型高速离心机：上海安亭科学仪器厂；UV-3200PC型紫外可见分光光度计：上海美谱达仪器有限公司；WSC-S型测色色差计：上海精密科学仪器有限公司；QYC-200型全温培养摇床：上海新苗医疗器械制造有限公司；SHZ-DⅢ型循环水式真空泵：巩义市予华仪器有限公司；RE 2000A型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；HL-2型恒流泵：上海沪西分析仪器厂有限公司；BSZ-100-LCD型自动部分收集器：上海琪特分析仪器有限公司。 1.3 试验方法 1.3.1 样液制备 参照前期试验艾草总黄酮的最佳提取工艺[10]：乙醇浓度 43%、提取温度 80℃、料液比 1∶69（g/mL）、超声功率350 W，提取时间40 min，在此条件下得到艾草总黄酮提取率最高为18.62%，纯度为36.1%，收集备用。 1.3.2 大孔吸附树脂预处理 将 6 种 树 脂 （D101、HP-20、ADS 17、DM301、HPD500、AB-8）用95%乙醇溶液浸泡24 h，浸泡至充分溶胀，于100目筛中用蒸馏水充分洗涤，无乙醇味且流出的洗涤液澄清不浑浊，后置于盐酸溶液（5%）中浸泡5 h用蒸馏水过100目筛充分洗涤，直至pH试纸显示流出的洗涤液呈中性，再于5%氢氧化钠溶液浸泡5 h，用蒸馏水充分洗涤，直至流出的洗涤液使pH试纸显示中性，最后将处理好的树脂置于蒸馏水中备用。 1.3.3 大孔吸附树脂筛选 分别称取上述预处理后的6种大孔树脂各2.0 g，置于50mL的锥形瓶中，加入20mL艾草总黄酮粗提液，置于30℃恒温振荡箱中，于150 r/min转速下充分振荡24 h，真空抽滤，测定滤液中艾草总黄酮的浓度。用蒸馏水冲洗，直至大孔吸附树脂表面的艾草总黄酮洗净为止，抽滤得到吸附饱和的树脂，再加入80%乙醇溶液20 mL作为解吸液，在温度30℃、转速150 r/min的恒温振荡箱中充分振荡24 h，真空抽滤，测定滤液的总黄酮浓度。大孔吸附树脂吸附量、吸附率和解吸率的计算公式如下： 式中：Q 为大孔树脂吸附量，mg/mL；Q1、Q2分别为大孔吸附树脂吸附率和解吸率，%；C0为吸附前艾草总黄酮溶液浓度，mg/mL；C1为吸附后艾草总黄酮溶液浓度，mg/mL；C2为艾草总黄酮溶液解吸液中浓度，