姜中姜辣素和黄酮的提取及抗氧化性研究.docxVIP

? ? 姜中姜辣素和黄酮的提取及抗氧化性研究* ? ? 卢 敏，黄 艳，陈艳艳，王福梅 (河南城建学院生命科学与工程学院，河南 平顶山 467000) 姜主要种植在我国中部、东南和西南部，是药中佳品，主要用于治疗风寒感冒、呕吐、痰饮等，具有抗菌消炎、抗氧化、降血糖血脂[1-2]等功能。姜中含有糖类、蛋白质、脂类、维生素和多种微量元素等营养物质[3-4]，还含有许多药理活性物质，如姜辣素、黄酮、挥发油、多糖等[5]。姜辣素具有多重生理功效，其中抗氧化能力最强[6]。黄酮是一种天然抗氧化剂，可以清除人身体里面游离的氧自由基，减缓细胞的衰亡。黄酮及姜辣素是生姜具有抗氧化活性的主要原因[7-8]。生姜对多种肿瘤细胞的活性均有较好抑制作用[9]。生姜中的6-姜烯酚可以有效地保护脑缺血后的大脑[10]，此外，生姜对于脂肪肝也具有保护作用[11]。在2020年的新型冠状病毒疫情期间，《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第七版)》中将生姜等中药材用于治疗新型冠状病毒肺炎。生姜具有特殊风味、药效温和无毒，可长期食用且无副作用[12]，目前，其常用于调料品。该研究以干姜为原料，分析不同提取方法对姜辣素和黄酮含量的影响，以及其抗氧化活性，旨在为生姜的加工利用提供依据。 1 实 验 1.1 材料与试剂 干姜，罗平东恒姜业有限公司。姜经干燥、粉碎后过60目筛，10 g每份分装保存备用。分装好的姜粉加60 mL石油醚，静置6 h后脱脂，离心后烘干备用。 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、芦丁标准品，北京索莱宝科技有限公司；2，4，6-三吡啶基三嗪(TPTZ)，上海麦克林生化科技有限公司；VC抗坏血酸，天津市北联精细化学品开发有限公司。 1.2 实验仪器 GENESYS 10S紫外分光光度计，美国赛默飞世尔科技公司；QΜINTIX型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；PE Eenspire型酶标仪，美国PE公司；2XZ-2型冷冻干燥机，宁波新芝生物科技股份有限公司等。 1.3 实验方法 (1)姜辣素的提取 超声波法：取一份脱脂姜粉，加60%的乙醇溶液150 mL，超声功率600 W，10 min，离心取上清，旋转蒸发浓缩。纤维素酶法：取一份脱脂姜粉，加400 mL蒸馏水、0.14 g纤维素酶，65 ℃放置85 min，加无水乙醇后55 ℃沉淀25 min，离心取上清液，旋转蒸发浓缩。将上述浓缩液加入3倍体积的无水乙醇，4 ℃沉淀10 h，5000 r/min冷冻离心20 min，取上清液，冷冻干燥，得固体粗品。 (2)黄酮的提取 微波辅助法：取一份脱脂姜粉，加75%的乙醇溶液200 mL，微波功率600 W，25 s，置于室温浸提4 h，取上清液，旋转蒸发浓缩。超声波法：取一份脱脂姜粉，加90%的乙醇溶液150 mL，超声功率600 W，40 min，取上清液，旋转蒸发浓缩。将上述浓缩液加3倍体积的无水乙醇，4 ℃沉淀10 h，5000 r/min冷冻离心20 min，取上清液，冷冻干燥，得固体粗品。 1.4 姜辣素和黄酮含量测定 1.4.1 姜辣素的含量测定 绘制标准曲线：准确量取0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL的香草醛标准溶液，不足1.0 mL的加75%乙醇补足，各管中加入浓度为8%的Na2CO3溶液1.5 mL，室温放置3～5 min，随后加入80%的Folin酚试剂0.75 mL，摇匀，32.5 ℃下反应2.25 h，在280 nm下测定吸光度值。以香草醛浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，确定回归方程[13]。 姜辣素样品含量测定：分别取超声提取和酶提取的提取液各1 mL，按照上述测定方法测量吸光度，带入回归方程，求得姜辣素样品浓度。进一步由计算公式(1)求得姜辣素含量，计算公式2求得姜辣素纯度。 (1) 式中:2.003为香草醛换算姜辣素的系数；Y为与标准曲线对应的浓度，mg/mL；V0为样品提取液体积，mL；W为样品重量，g。 (2) 式中:C为根据标准方程计算出的样品含量，mg/g；M为样品的质量，g；m为粗提物质量，mg。 1.4.2 黄酮的含量测定 绘制芦丁标准曲线：准确量取0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL芦丁标准品溶液，分别加入10 mL容量瓶中，不足5 mL加60%的乙醇补足，加入5%的NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加入4%的NaOH溶液4 mL，混匀，60%的乙醇溶液定容至10 mL摇匀，静置15 min，在510 nm波长下测吸光度。以吸光度为纵坐标，芦丁质量浓度为横坐标，绘制标准曲线确定回归方程。 黄酮样