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循证检验医学在elisa临床检验中的应用 21世纪的检验医学是检验医学的基础。循证检验很重要的环节就是明确提出需解决的问题, 对此问题进行系统文献查询, 找出证据, 实践证据, 保证提供给临床的数据准确可靠。在ELISA工作中, 如何确保提供临床的数据可靠, 如何选择试剂?操作中关键问题是什么?以及证据的后效评价, 检验项目的合理组合等问题, 多年来本室一直探讨着具体方法, 现分析如下, 供同道参考: 1 elisa的检测结果 试剂的质量直接影响试验结果的质量, 做好ELISA质量控制第一步应该选用高质量试剂, 那么怎样遵循证据选用适合本室的试剂呢? 1.1可依据卫生部中心及省临检中心组织的室间质评的公布资料, 了解试剂在使用评价中的质量。质量较好的试剂使用趋于集中, 占用户量的百分比较高, 因此应关注试剂盒临床使用评价的定期公布资料。 1.2当我们选择两家试剂质量, 占用户量都接近时, 可同时使用做室间质评, 可依据反馈成绩优秀的试剂为适合本室使用的试剂。 1.3在本试验室环境中用1ng/ml质控血清、阳性样本血清各5份, 阴性血清10份, 混入当天标本中测定, 检验灵敏度、特异性、符合率。优质试剂灵敏度, 特异性, 符合率均应为100%, 孔间A值平均之差10%, 空白孔A值在0.004以下。 1.4选用试剂盒外贴有中国药品生物制品检定所批检的防伪标签, 试剂盒名称、商标、批准文号、出厂日期、失效日期、批号、存放环境、生产单位名称及地址等项目必须条条清楚。 ELISA测定操作非常简单, 满足试验条件, 试剂盒要求, 就是“合格”, 但“合格”操作的精密度, 准确度极差, 许多阶段存在系统误差。分析系统误差的原因所在, 温育, 洗板是两个影响检测结果的关键因素。 温育这一步各试验室形式不尽相同。对此问题笔者进行系统的资料查询, 依据《临床检验ELISA指南》提到保温方式及省临检中心检测两对半, 丙肝操作标准中的保温方式, 本室采用37℃水浴漂浮应用近七年, 效果满意。在洗板问题上很多资料记载:为把板孔中非特异性吸附的干扰物洗涤下来, 可以增加洗涤次数或延长浸泡时间, 达到洗涤效果。本室所使用的洗板次数增加二次达到洗涤要求是通过反复实践和参照国家中心免疫室李金明老师《如何正确进行ELISA测定操作》通过循证检验实践在1～8次洗涤过程中第七次时阳性/阴性值保持最大不变。如想减少洗板次数也可采用流水冲洗式及浸泡式结合, 此点在临床检验ELISA指南中可查到, 三级甲等医院的洗涤方式也是采用流水及浸泡结合, 我室采用流水冲洗洗板机洗板4～5次可达到阳性/阴性值最大不变, 各试验室均可用此法找到特定试验室的最佳洗板次数。 运用循证检验医学的理念回顾近几年来我室采取温育洗板的试验结果是可靠满意的。漂浮水浴优越于其他温育方式, 原因如下:一、将微孔板从室温拿至温箱中时, 孔内温度从室温升至37℃需要一定时间, 漂浮可使板孔温度迅速平衡, 保证在设定的温度下有足够的反应时间。二、“边缘效应”的排除, 将微孔板从室温置于37℃水浴箱, 板孔升温时在外周孔与中心孔之间可能存在热力学梯度, 使用水浴漂浮就可以很容易地排除“边缘效应”提高测定的重复性。室内质控, 室间质评, 临床结果反馈都可以说明目前的漂浮水浴属最佳温育方式。 3 elisa法测hbv基因 循证检验医学就是在大量可靠的临床应用资料和经验的基础上, 研究检验项目临床应用的效果, 为临床诊断及其他目的提供最有效、最实用、最经济的检验项目及组合。随着人们对乙肝病毒检测的深入研究及ELISA试剂盒的不断上市, 笔者认为Pre-S1的检测比起HBc Ab-IgM测定更能早期反映HBV感染与复制情况, 可用其取代HBc Ab-IgM检测。按照循证检验医学原则查阅《中华肝脏病杂志》看到:PreS1与HBV-DNA, HBe Ag检测率高度符合, 是十分重要的复制指标, 是HBV早期感染、预后和药物疗效判断的敏感指标。HBe Ab阳性, Pre-S1阳性提示病毒复制及预后不好, 也可因与二对半关系不密切独立检测, 作为病毒复制指标较HBe Ag敏感, 对二对半检测起重要补充作用, 建议临床常规进行Pre-S1检测。 按照循证检验医学原则对门诊患者按病情的需要选用, 其目的也是为了选择最佳方案替患者尽快做出诊断, 对于ELISA法测HBV-M也应包括单人项目不能因考虑仪器的功能或经济效益而拒绝单项检测, 总之最终为临床诊断提供有效、实用、经济的检测项目, 使之临床治疗更加科学, 更加合理。 附注:选择洗板机洗涤次数简单试验 选择4×8HBsAgELISA包被板条, 每2×8孔分别加入相同一份弱阳性和一份阴性样品, 加入酶结合物温育, 洗板孔时按第一排4孔洗一次, 第二排4孔二次, 第三排4孔三次至