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我国生猪多系统衰竭综合征诊断方法的研究进展 猪断奶后多系统萎缩综合征（pmw）是由猪圆形病毒2（pcv2）引起的新疾病。PCV是1974年在猪肾传代细胞系PK-15中发现的一种污染病毒, 该病毒不产生细胞病变效应 (CPE) , 无致病性, 命名为PCV1;而后在PMWS中分离的猪圆环病毒, 有致病性, 命名为PCV2。PMWS主要感染1~5月龄的猪, 发病率为4%~30%, 致死率为70%~80%。患病断奶猪和生长猪临床表现为进行性消瘦、呼吸困难、皮肤苍白、黄疸、腹泻和体表淋巴结肿大, 多种组织发生广泛的肉芽肿性炎症, 肉芽肿性淋巴结炎、间质性肺炎、肝炎、间质性肾炎和胰腺炎。病理组织学变化主要是淋巴细胞组织不同程度的衰竭萎缩, 淋巴细胞减少。该病在世界许多养猪国家都有发生, 我国也有本病流行。PMWS严重影响猪的生长发育, 其发病机理、传染源等尚不清楚, 本病没有有效的治疗方法, 抗生素对PMWS患病猪无效。但抗生素的使用和良好的饲养管理有助于防止再次感染。目前还没有疫苗可供应用。 根据临床症状和病理变化只能作出初步诊断, 确诊PMWS必须依靠实验室检查。目前已建立和应用的实验室PMWS诊断技术有病毒分离与鉴定、聚合酶链式反应 (PCR) 、间接免疫荧光试验 (IFA) 、间接酶联免疫吸附试验 (IELISA) 、免疫组织化学试验 (IHC) 等。病毒分离与鉴定多用于急性病例的确诊和新疫区的确定;PCR方法用于检测PCV病毒的核酸, 应用型特异性引物可对PCV1和PCV2定型;IFA、间接ELISA方法主要用于检测PCV抗体;IHC方法主要用于检测PCV抗原, 并进行病毒的组织学定位。笔者对我国生猪PMWS的诊断方法进行了系统归类, 并建立了相应的诊断标准。以保证我国PMWS的诊断标准与国外诊断标准的一致性。 1 ph值的变化 最常见的、也是确诊PMWS所必需的临床症状是患病猪衰竭和生长发育不良, 进行性消瘦, 还有精神不振, 食欲不佳, 被毛粗乱, 消化不良, 肌肉衰弱无力, 腹泻, 皮肤苍白, 黄疸以及咳嗽、喷嚏、呼吸困难等呼吸系统症状。体表淋巴结, 特别是腹股沟淋巴结肿大。其他不常见的症状有发热, 嗜睡, 胃溃疡, 中枢神经紊乱, 猝死。上述临床症状不一定同时在同一头猪上出现, 发病猪场在一段时间内多数猪会出现上述症状, 一些临床症状由于继发感染或双重感染而恶化。 2 细菌感染猪淋巴结及病料分析 最显著的病变是全身淋巴结, 特别是腹股沟淋巴结、肠系膜淋巴结、气管、支气管淋巴结及下颌淋巴结肿大2~5倍, 有的可达10倍;切面硬度增加, 呈均匀的苍白色, 集合淋巴小结肿大。但在PMWS感染猪也可观察到正常或萎缩的淋巴结。发生细菌感染猪的淋巴结可见炎性和化脓性病变, 使病变复杂化。肺肿胀不崩陷, 有散在、大而隆起的橡皮样硬块。严重的病例肺泡出血, 部分病例肺尖叶和心叶萎缩或固质化。脾中度肿胀, 呈肉样变。半数病例的肝无明显异常, 其他病猪则表现不同程度的虎斑状外观, 并伴有轻度或中度萎缩, 有的病例肝肿胀。肾水肿、苍白, 被膜下有白色坏死灶, 盲肠和结肠黏膜充血或瘀血。许多PMWS感染猪有支气管肺炎和胃溃疡, 支气管肺炎与细菌感染有关, 胃溃疡和PCV2感染无直接关系, 胃溃疡发生的原因是多方面的。胃内病灶引起的内出血是导致部分PMWS猪死亡的原因, 也是导致病猪皮肤苍白的原因。 3 散核巨细胞的检测 淋巴结的皮质及副皮质区显著扩张, 有单核细胞或巨噬细胞、组织细胞浸润, 有时还散在大量的多核巨细胞。淋巴细胞减少, 淋巴结基质常增生或有嗜酸性细胞浸润。淋巴滤泡有由组织细胞、类上皮细胞、巨噬细胞、多核巨细胞、嗜酸性白细胞、淋巴细胞集聚形成的肉芽肿。其他组织有广泛的淋巴细胞、单核细胞、组织细胞浸润。 4 病毒的分离和鉴定 4.1 材料表面 4.1.1 d+氨基葡萄糖溶液 1640营养液, 犊牛血清, 青霉素 (1×105μg/mL) 与链霉素 (1×105μg/mL) 溶液, 氯仿, 300 mmol/L D (+) 氨基葡萄糖, Hank’s平衡盐溶液。 4.1.2 细胞培养 无PCV污染的猪肾传代细胞PK-15。 4.1.3 组织病理学检查 在发病早期, 无菌采取病猪血清。对病死猪立即采取肺、扁桃体、淋巴结、脾、肾、肝等组织数小块, 置冰瓶内立即送检或置于-25 ℃~-30 ℃冰箱中待检, 或加500 mL/L甘油生理盐水, 4 ℃保存送检。 4.1.4 重组菌rpmi140 若样品经PCR检测为PCV阳性, 血清可直接使用;肺、淋巴结、扁桃体、脾、肾、肝等组织混合剪碎后研磨成糊状, 加入含1×105μg/mL 链霉素、1×105μg/mL青霉素、200 μg/mL两性霉素B的RPMI 1640营养液, 制成100 g/L