ni2+硼砂-电解质体系中微囊藻毒素的测定.docxVIP

ni2+硼砂-电解质体系中微囊藻毒素的测定 在淡水环境中污染海藻已成为一个全球环境问题。海藻不仅可引起生物身体的快速毒性，还可成为生物肝脏肿瘤的促进剂。因此,研究和发展藻毒素的分析检定方法以对其进行监测十分重要。 藻毒素有很多类型,分布较广且重要的是微囊藻毒素(microcystins,MCs)。它们是一组环状七肽物质,结构通式见图1。其中X和Z在不同的MC亚型中代表不同的L 或D型氨基酸,并以之为该亚型命名。存在较普遍的MC亚型是LR、RR和YR,L、R和Y分别代表亮氨酸、精氨酸和酪氨酸。 目前测定MC的方法主要有色谱法、酶联免疫法和蛋白磷酸酶抑制法等。色谱法结果比较可靠,但是所用仪器价格昂贵、操作复杂、需要专业人员进行操作,而且分析周期长、样品用量大。酶联免疫法比较方便,容易掌握,但假阳性出现几率大,重现性差。蛋白磷酸酶抑制法灵敏度高、检测限较低,但该方法尚不够成熟,酶反应体系中的很多变量尚未进行量化和建立一个统一的标准,方法选择性较差,且价格昂贵。此外,蛋白磷酸酶价格很昂贵,若自己制备则对设备和操作人员的要求非常高。可见,这些方法要实际应用于环境监测都存在较大困难。此外,对MC进行自动化监测是MC分析方法发展的必然趋势,但目前研究较少。极谱法测定灵敏度和检测限较高,是电化学分析和环境监测中应用较广的方法之一,有广阔的发展前景。本文研究了MC的单扫描示波极谱法测定,为藻毒素的分析检定提供了一种新的方法和途径。 1 实验部分 1.1 仪器 JP-2型示波极谱仪。三电极系统:滴汞电极为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝电极为辅助电极。 1.2 次蒸馏液配置 微囊藻毒素MC-RR,由中国科学院水生生物研究所制备并提供。实验中所用其它试剂均为分析纯,水为二次蒸馏水。 缓冲溶液配置:准确称取9.532g Na2B4O7·10H2O于250ml烧杯中,加入二次蒸馏水约100ml,加热至溶解,移入250ml容量瓶中,用二次蒸馏水定容,摇匀后待用。 金属镍离子溶液配置:准确称取0.1454g Ni(NO3)2·6H2O于50ml烧杯中,加入二次蒸馏水约10ml,溶解后移入50ml容量瓶中,用二次蒸馏水定容,摇匀后待用。 1.3 微囊藻毒素的加入 准确量取Ni(NO3)2溶液0.3ml,Na2B4O7溶液2ml于10ml容量瓶中,加入所需微囊藻毒素。再用二次蒸馏水定容,摇匀后转移至电解池中,静置5 min后在极谱仪上进行阴极化扫描,起始电位为-1.2V。 2 结果与讨论 2.1 底液初始电位 用JP-2型示波极谱仪分别对水溶剂和MC水溶液进行扫描,无极谱波出现。对由Ni(NO3)2溶液和Na2B4O7溶液组成的底液进行扫描,起始电位为-1.2V时也没有极谱波出现。在该底液中加入MC后,在-1.55V出现一个波形良好而稳定的极谱波(见图2)。 2.2 条件试验 2.2.1 mc与nh4乙二胺的反应 试验了Ni2+_硼砂、Co2+_硼砂、NaH2PO4、HAc_NaAc、NH4_乙二胺等不同支持电解液,MC只在Ni2+_硼砂底液中产生极谱波。 2.2.2 镍离子对mc极谱波形成的影响 固定硼砂浓度为2×10-2mol/L,MC浓度为3mg/L,改变镍离子浓度,观察Ni2+浓度对测定的影响,得到结果如图3所示。 实验结果表明,(1)镍离子对该极谱波的形成具有关键性作用,当体系中无镍离子时,不产生MC极谱波;(2)该实验条件下,镍离子浓度较低时,极谱波的峰高随镍离子浓度的增大而增加,但当镍离子浓度增大到一定值时,极谱波的峰高逐渐趋向一个极值。当镍离子浓度大于4×10-4mol/L时,溶液浑浊。因此,将镍离子浓度确定为3×10-4mol/L。 2.2.3 硼砂溶液浓度对测定结果的影响 在这一测量体系中,硼砂起着稳定体系pH值的重要作用,固定镍离子浓度为3×10-4mol/L,MC浓度为3mg/L,改变硼砂溶液的浓度,得到实验结果如图4所示。 由图4可见,在该实验条件下,硼砂浓度存在一个最佳值,高于或低于这个值均不利于MC的测定。因此,本实验选定硼砂的浓度为2×10-2mol/L。 2.3 元线性回归分析 在上述实验条件下,改变MC浓度,绘制工作曲线,结果如图5所示。 由图5可见,在该实验条件下,MC在1.50～8.00mg/L浓度范围内与极谱峰电流有良好的线性关系,进行一元线性回归分析,得到线性相关系数为0.998。用3倍标准偏差法得到本方法的检测限为0.07mg/L。 2.4 mc峰电流的计算方法 在选定实验条件下,按实验方法测定不同时间的MC峰电流。结果表明,测量体系至少在48小时内很稳定,多次测定结果的相对标准偏差(RSD)为1.83%。 2.5 不干扰mc测定的药物 干扰实验结果表明,在此实验条件下,Na+、K2+、Ca2+、Mg2+、