杂交沙棘新品种深-杂的组织培养研究.docx

? ? 杂交沙棘新品种深-杂的组织培养研究 ? ? 田新华 , 卢慧颖 , 曹焱 , 殷东生 (黑龙江省林业科学研究所，哈尔滨150081) 杂交沙棘新品种深-杂的组织培养研究 田新华 , 卢慧颖 , 曹焱 , 殷东生 (黑龙江省林业科学研究所，哈尔滨150081) 以杂交沙棘新品种深-杂为供试材料，探索筛选适合苗木繁殖的培养基配方及条件。试验表明：增殖培养配方为：1/2MS(大量元素、钙盐减半)+6-BA0.5mg/L+IAA0.2mg/L为杂交沙棘的分化增殖培养基，分化芽苗数较多，达到3.89倍，苗木高度适中。生根培养基：1/4MS(大量元素、钙盐为正常值的1/4)+6-BA0.3 mg/L+IBA0.5 mg/L，生根率达87.5%，茎基部生根，根粗壮侧根多。 杂交新品种；组织培养；苗木繁育 沙棘是胡颓子科(Elcrecrgrlcreecre)沙棘属(HippophcreL.)植物。我国有6种8亚种是沙棘面积和沙棘资源蕴藏量最大的国家[1-3]。 沙棘含有丰富的营养成分，其中沙棘油被誉为“生命之油”，在提高人体免疫功能，预防并抑制肿瘤发生方面应用前景广阔[4-7]；果实加工成果汁、果醋、果酱等各种饮料和食品，保健价值很高[8-9]，沙棘汁含有超氧化物歧化酶，具有清除细胞膜上自由基和抗氧化作用及抗癌作用。 沙棘繁殖技术中研究最多、应用最广的是扦插育苗，但受材料数量限制，难以快速大量生产。本研究针对杂交沙棘新品种(系)深-杂展开组培快繁技术研究，筛选不同培养阶段的适宜培养基配方，并分析不同培养条件对沙棘组织培养的影响，探索杂交沙棘新品种(系)组织培养中存在的主要问题及克服方法，旨在建立一套完整的良种繁殖配套体系，使良种与良法结合，为今后优良品种大规模工厂化育苗提供技术支持。 1 试验材料与处理 黑龙江省林科院内种植沙棘杂交新品种(系)深-杂的枝条。 将室外剪取的深-杂的枝条采回后用加洗衣粉的自来水浸泡30 min，再用牙刷刷洗掉表层尘垢，流水冲洗15 min，最后用加洗洁净的自来水浸泡刷洗后，流水冲洗干净，根据需要截成10～15 mm长的茎段准备消毒接种。 将茎段置于超净工作台上进行灭菌处理：(1)75%酒精浸泡30s，0.1%HgCl2浸泡2 min，然后用无菌水冲洗3次；(2) 75%酒精浸泡30s，0.1% HgCl2浸泡3 min，用无菌水冲洗3次；(3)0.1% HgCl2浸泡2.5 min，然后用无菌水浸泡40 min；(4) 0.1% HgCl2浸泡3.5 min，然后用无菌水浸泡40min；以上材料灭菌后取出，用无菌滤纸吸干材料表面多余水分。每组处理30个茎段，4d后观察效果。 2 试验方法 2.1 诱导侧芽生长 以1/2MS(大量元素、钙盐减半)为基本培养基，在无菌条件下将单芽茎段接种于1/2MS+6-BA0.5mg/L+IAA0.5 mg/L+20g/L蔗糖+琼脂粉6g/L培养基上诱导腋芽苗生长。 2.2 试管苗分化增殖培养 表1 因素水平表 待茎段腋芽伸长后，分别转接于以1/2MS为基本培养基，添加6-BA、ZT激素不同浓度的培养基进行增殖培养，筛选优化杂交沙棘试管苗的增殖培养基配方。以6-苄基腺嘌呤(6-BA)，生长素(IAA)为2个因素，每因素设置3个水平。采用L9(34)正交试验设计表进行芽增殖培养基筛选。每个处理2次重复，每个重复接种10瓶，培养25d调查苗高、分化增殖情况。 2.3 试管苗生根培养 将经过分化增殖培养、同一簇生长的试管苗，以2棵为1组转入下列4种不同的生根培养基进行生根培养。 Ⅰ 1/4MS(大量元素、钙盐为正常值的1/4)+NAA0.4 mg/L +KT0.3 mg/L； Ⅱ 1/4MS(大量元素、钙盐为正常值的1/4)+6-BA0.3 mg/L +IBA0.5 mg/L； Ⅲ 1/2MS(大量元素、钙盐为正常值的1/2)+IBA0.5 mg/L； Ⅳ 1/2MS(大量元素、钙盐为正常值的1/2)+NAA0.2 mg/L； 每个处理2次重复，每个重复接种10瓶，培养35d调查苗木生根情况。培养基中添加蔗糖20g/L，日产琼脂粉6g/L，pH值调至5.8，培养温度白天25±1℃，夜间20±1℃，光照强度2000 lx，光照时间12h/d。培养温度白天25±1℃，夜间20±1℃，光照强度2000 lx，光照时间12h/d。 2.4 杂交沙棘移栽试验 挑选生根质量好的试管瓶苗置于遮荫的阳台上炼苗，预培养5d。然后对试管苗进行移栽试验研究，筛选适合的移栽基质及培养条件。 2.5 统计分析方法 采用Microsoft Excel 2003的统计工具进行计算并作图，dps7.05数据统计软件对试验数据进行方差分析和差异显著性测验(SSR法)[10]。 3 结果与分析 3.1 不同