肉制品中食品添加剂（山梨酸、苯甲酸）的测定—紫外分光光度计的使用.pptx

技能点：紫外分光光度计的使用 目录页 （紫外分光光度计的使用） 一、紫外分光光度计概述 紫外分光光度法是利用物质对紫外光谱区域内的光具有选择性吸收的现象，对物质进行定性和定量分析的方法 。用于测量和记录待测物质分子对紫外光的吸光度及紫外吸收光谱，并进行定性定量以及结构分析的仪器，称为紫外吸收光谱仪或紫外分光光度计。 （紫外分光光度计的使用） 一、紫外分光光度计概述 （一）仪器工作原理 在一定的条件下，吸光物质对单色光的吸收符合朗伯­比尔定律，即 ： A=εbc 式中 A 为吸光度；b 为光程长度（即吸收池厚度），单位为 cm；c 为吸光物质的物质的量浓度，单位为 mol/L；ε为摩尔吸光系数，单位为 L/(mol∙cm)； 当 b一定时，吸光物质的吸光度为其浓度 c 的单值（线性）函数。 因此对吸光物质的浓度的测试可直接归结为对吸光度 A 的测试。 （紫外分光光度计的使用） 一、紫外分光光度计概述 （二）仪器的结构 目前，紫外分光光度计的型号较多，但它们的基本构造都相似，都由光源、单色器、样品吸收池、检测器和信号显示系统等五大部件组成，其组成框图见图 1-1 。 （紫外分光光度计的使用） 二、紫外分光光度计的使用 操作步骤： 开机 选择波长 校准 测量 数据处理 关机 （紫外分光光度计的使用） 三、紫外分光光度计的维护与保养 （一）氘灯的更换 1）关闭电源，取下波长调节钮，掀开仪器盖板。 2）待灯冷却后，用螺丝刀将接线架上三根氘灯引线松开（记下三根引线的颜色）， 松开氘灯固定螺钉，取出氘灯座，松开夹紧螺钉，换上新氘灯，调整位置，重新拧 紧螺钉，将氘灯接线按原来引线的颜色接好。 3） 将波长调在 220nm 处，接上电源， 打开氘灯，检查光斑是否进入狭缝，如不进入，松开图 1-2 中的“1”，转动氘灯出光孔或松开图1-2中的“3”，移动氘灯至 氘灯光进入狭缝为止（注意！眼睛不可常看氘灯发出的紫光）。 （紫外分光光度计的使用） 三、紫外分光光度计的维护与保养 （二）波长准确度的校验 在紫外光区检 验波长准确度比较实用的方法是用苯蒸气的吸收光谱曲线来检查。图 1-3 是苯蒸气在紫外光区的特征吸收峰，利用这些吸收峰所对应波长来检查仪器波长准确度非常方便。 具体做法是：在吸收池滴一滴液体苯，盖上吸收池盖，待苯挥发充满整个吸收池后，就 可以测绘苯蒸气的吸收光谱。若实测结果与苯的标准光谱曲线不一致，表示仪器有波长误差，必须加以调整。 （紫外分光光度计的使用） 三、紫外分光光度计的维护与保养 （三）透射比正确度的检验 取0.006gK2Cr2O7溶于1000g 0.001mol/LHClO4标准溶液 。 0.001mol/LHClO4 溶液为参比，用 1cm 的石英吸收池分别在 235nm、257nm、313nm、350nm 波长处测定透射比，与表 1-4 所列标准溶液的标准值比较，根据仪器级别，其差 值应在 0.8%～2.5%之内。 表1-4 K2Cr2O7溶液透射比（25℃） （紫外分光光度计的使用） 三、紫外分光光度计的维护与保养 （四）吸收池的配套性检验 吸收池配套性检验的具体步骤 如下： 1）检查 2）标记 3）擦拭 4）检验 透射比的偏差小于0.5%的吸收池可配成一套。