肉原料肉中激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）的测定.pptx

激素（盐酸克伦特罗、莱克多巴胺）的测定概述 瘦肉精知识概述1 瘦肉精的测定方法2筛选-酶联免疫法法2.1 定性和定量-液质联用法2.2 定性和定量-气质联用法2.3 目录页 测定结果3 瘦肉精知识概述11.瘦肉精是什么？指的是一类动物用药，包括盐酸克仑特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和硫酸特布他林等，属于肾上腺类神经兴奋剂，“瘦肉精”添加到饲料中，可以增加动物的瘦肉量。2.瘦肉精的危害？食用含有 “瘦肉精”的肉会对人体产生危害，常见有恶心、头晕、四肢无力、手颤等中毒症状，特别是对心脏病、高血压患者危害更大。长期食用则有可能导致染色体畸变，会诱发恶性肿瘤，至于究竟摄入多大量，如何导致恶性肿瘤，有关病例研究国内外尚无定论。但是，近几年，各地 “瘦肉精”致人中毒的案例时有发生。 瘦肉精知识概述1早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的，将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。 2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法2.3瘦肉精的确证和定量——气相色谱串联质谱法瘦肉精的测定方法2 2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)瘦肉精的测定方法2(1)原理：基于抗原抗体反应进行竞争性抑制测定。微孔板包被有针对克仑特罗IgG的包被抗体。克伦特罗抗体被加入，经过孵育及洗涤步骤后，加入竞争性酶标记物、标准或试样溶液。克仑特罗与竞争性标记物竞争克仑特罗抗体，没有与抗体连接的克伦特罗标记酶在洗涤步骤中被除去。将底物（过氧化尿素）和发色剂（四甲基联苯胺）加入到孔中孵育，结合的标记酶将无色的发色剂转化为蓝色的产物。加入反应停止液后使颜色由蓝转变为黄色。在450nm处测量吸光度值，吸光度比值与克伦特罗浓度的自然对数成反比。 2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)瘦肉精的测定方法2备注：1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡 操作要求开展检测。 2.1筛选是否含有瘦肉精——“瘦肉精”快速检测卡瘦肉精的测定方法2瘦肉精检测原理: “瘦肉精”快速检测卡应用了竞争免疫 层析的原理，样本中的“瘦肉精 ”在流动的过程中与胶体金（或胶体硒）标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上“瘦肉精”－蛋白偶联物的结合。如果样本渗出液中“瘦肉精”含量大于3ng/ml，检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。 2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法瘦肉精的测定方法2备注：1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定2.本方法检出检出限：0.5ng～4ng(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心，上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。(2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008 2.3瘦肉精的确证和定量——气相色谱串联质谱法瘦肉精的测定方法2备注：1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng(1)原理：固体试样减碎，用高氯酸溶液匀浆，液体试样加入高氯酸溶液，进行超声波加热提取，用异丙醇+乙酸乙酯（40+60）萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇+浓氨水(98+2)溶液洗脱，洗脱液浓缩，经N,O-双三甲基硅烷三氟乙酰胺（BSTFA)衍生后于气质联用仪上进行测定，以美托洛尔为内标，定量。(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003. 瘦肉精的测定方法2备注在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更多使用液质联用。 结果计算与评价3 酶联