红小豆上胞囊线虫的发育动态研究.docx

? ? 红小豆上胞囊线虫的发育动态研究 ? ? 李静，陈井生，郭永霞，3，周园园，3，曹尚 （1.黑龙江八一农垦大学，大庆 163319；2.国家杂粮工程技术研究中心；3.黑龙江省作物有害生物互作生物学及生态防控重点实验室；4.重庆三峡学院） 大豆胞囊线虫（Soybean cyst nematode，SCN）病，是危害世界大豆生产的最主要病害之一。研究发现，大豆胞囊线虫的二龄幼虫侵入植物的根系后，会引起根系组织的机械损伤和代谢紊乱，感病的大豆会表现出根系短粗，植株矮化、萎黄和不易结实等症状[1]。大豆胞囊线虫是一种典型的定居性内寄生线虫，对大豆等重要油料作物危害严重。由于线虫分布广泛，生存能力强，危害性大等特点，防治相对困难。大豆胞囊线虫除了对大豆造成危害外，还可以在其它500多个作物种类上寄生。主要为害的作物是豆科，如：菜豆、兵豆、箭舌豌豆、香豌豆、豌豆等[2]。 红小豆（Vigna angularis），学名赤豆，因种皮呈红色，又名赤小豆、朱豆，是豆科一年生、直立或缠绕草本植物。我国的红小豆种植面积和总产量均居世界首位[3]。红小豆营养丰富，富含淀粉、蛋白质、铁、钙、磷、钾等矿物质元素，脂肪含量低。同时现代研究发现，红小豆对人体有显著的抗氧化、护肝护肾、抗癌、降血压降胆固醇、抗菌抗病毒等多种作用。由于红小豆是医食同源作物，且红小豆的价格比主要粮食作物高、投入少，对农民来说，红小豆是重要的经济作物，也是欠发达地区脱贫攻坚的主要收入来源。因此，保证红小豆的产量对于农民来说是非常重要的。近些年，关于红小豆的研究开始逐渐增多[4]。然而，红小豆上的病害逐年增加，每年因病害引起的减产问题十分严重。红小豆上的大豆胞囊线虫病也严重影响了小豆的产量和品质。然而，农民对该病缺乏了解，导致未能及时有效地预防该病，造成不必要的经济损失。现阶段，关于大豆胞囊线虫对红小豆的致病性不明确，在红小豆根内的发育状况尚无报道，大豆和红小豆胞囊线虫的侵染差异也尚不清楚。 大豆胞囊线虫（Heterodera glycines Ichinohe）是一种土传内寄生线虫[5]，是危害全球大豆生产的主要病害之一，由俄罗斯植物病理学家Jaczevski 在中国东北地区首次发现[6]。大豆胞囊线虫由卵孵化，一龄幼虫（J1）在卵内发育，二龄幼虫（J2）在15~30 ℃开始发育[7]，幼虫侵染大豆根并在根内寄生生活[8]，定殖后虫体开始膨大，经过蜕皮，三龄、四龄幼虫出现。雌虫与雄虫交配最后一次蜕皮后，虫体发育为成虫，完成一个世代的发育循环[9]。该病害可使通常会使中国东北大豆产量减少5%~100%[10]。随着大豆种植面积的逐年增加，大豆胞囊线虫病每年给全球造成的经济损失超过16.2 亿美元[11]。大豆胞囊线虫的世代受温度和季节的影响，如果温度条件适宜，它完成一个世代大约需要25~30 d 的时间。由于温度的影响，在北方地区，如东北，大豆胞囊线虫一年可发生3~4 代，第一代历时55 d[12]，在南方一年可发生4~5 代。但是，在不同植物中，其发育周期略有不同。 研究以大豆和红小豆为试验材料，在根部接种二龄幼虫。取样后，用次氯酸钠-酸性品红染色法对根组织中的线虫进行染色，并在体视显微镜下对各龄期的根部线虫数量进行检测和计数，明确大豆胞囊线虫对于红小豆的侵染情况，大豆胞囊线虫在大豆和红小豆根部的发育动态揭示了大豆胞囊线虫在红小豆根部的发育过程和完成一个生活史所需的大致时间，为大豆胞囊线虫在红小豆上的有效防治提供了科学的理论依据。 1 材料与方法 1.1 供试材料 1.1.1 供试品种 试验所用的大豆品种为合丰50，由黑龙江省农科院大庆分院提供； 试验所用的红小豆种质资源为北7，由黑龙江八一农垦大学作物育种研究室提供。 1.1.2 供试线虫 试验所用到的胞囊为黑龙江省农科院大庆分院胞囊线虫发病土壤分离获得。胞囊置于自制孵化池中孵化。 大豆胞囊线虫胞囊和J2 的获得如下： 土壤样品采集自黑龙江省农科院大庆分院实验基地，采用改良淘洗-过筛法[13]进行胞囊分离。具体方法是：用2 000 mL 烧杯取适量的大豆根际病土，置于淘洗桶中。加入适量水搅拌均匀。静置10~20 s 后，依次通过堆叠的20 目、40 目、60 目、80 目金属筛，用强水流将金属筛上的杂物从20 目洗至40 目。再将80 目筛上的残留物反复冲洗至水流清为止。于体式显微镜下挑取饱满的胞囊。挑好的胞囊用0.5%NaClO 溶液消毒3~4 min，无菌水冲洗3 次。干燥后，将胞囊储存于4 ℃的冰箱中，备用。 大豆胞囊线虫悬液的制备：将胞囊放入自制的灭菌孵化池，将孵化池置于灭菌的培养皿中，向培养皿中加入适量无菌水，于25 ℃的恒温培养箱中培养孵化，期间更换无菌水，及时收集孵化出的二龄幼虫（J2），置于4 ℃冰箱内