西藏藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达的相关性研究.docxVIP

? ? 西藏藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达的相关性研究 ? ? 沈燕如，泥永淘，胡伟，李磊，欧珠罗布 1.西藏大学附属阜康医院消化内科，西藏拉萨 850000；2.西藏大学附属阜康医院实验室，西藏拉萨 850000；3.西藏大学医学院，西藏拉萨 850000 《2020全球癌症报告》显示，2018年全球结直肠癌新发193万例，死亡93万例，居第3位常见癌症和第2位常见癌症死亡原因[1]。纵观国内，结直肠癌位居第3位常见癌症和第5位常见癌症死亡原因[2]。与结直肠癌发病相关的主要基因突变靶点和信号调控通路中，研究最多且最典型的是表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）所介导的信号传导通路，而K-ras、PIK3CA基因是导致EGFR下游信号通路持续激活的主要原因之一。西藏海拔高，特殊环境及饮食背景下，藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达情况及其相关性值得探究，但目前鲜有相关研究报道。基于 此，本研究选取2020年9月—2021年9月于西藏大学附属阜康医院就诊的70例藏族结直肠癌患者为研究对象，分析藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变与EGFR基因表达情况及三者之间的相关性，旨在为藏族结直肠癌患者分子靶向治疗提供理论依据。现报道如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料 选取于本院诊治的藏族结直肠癌患者70例为研究对象。本研究通过西藏大学附属阜康医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。70例患者中男43例，女27例；年龄34～75岁，平均（53±11.8）岁。 1.2 纳入与排除标准 纳入标准：①手术切除肿瘤组织/内镜活检组织病理确诊结直肠癌；②临床资料完整；③世居西藏。排除标准：①有放疗或化疗史者；②合并其他恶性肿瘤者。 1.3 方法 1.3.1荧光定量PCR法检测K-ras、PIK3CA基因突变将石蜡包埋的结直肠癌组织5 μm厚切片，连续切10张。DNA提取试剂盒（厦门艾德生物医药科技股份有限公司）提取切片中的结直肠癌组织DNA，K-ras基因突变检测试剂盒和PIK3CA基因突变检测试剂盒检测K-ras基因第2、3、4外显子和PIK3CA基因第20外显子突变情况。 1.3.2免疫组化SP法检测EGFR基因表达EGFR单克隆抗体（鼠抗人）、pv-6000试剂盒、DAB染色液、PBS缓冲液（粉末）均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。按照试剂盒说明进行实验操作，采用PBS代替一抗作阴性对照，已知的阳性切片作阳性对照。以细胞质或细胞膜出现清晰棕黄色颗粒为阳性。 1.4 观察指标 分析藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达情况，三者与临床病理特征的关系及三者之间的相关性。 1.5 统计方法 采用SPSS 25.0统计学软件处理数据，计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验。相关性分析采用Spearman秩相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。 2 结果 2.1 K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达情况分析 70例藏族结直肠癌患者中有28例存在K-ras基因突变，突变率为40.0%；6例存在PIK3CA基因突变，突变率为8.6%；43例EGFR基因呈阳性表达，阳性率为61.4%。 2.2 K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达与临床病理特征关系 K-ras基因突变率，右半结肠癌患者高于左半结肠癌患者、TNMⅢ～Ⅳ期结直肠癌患者高于TNMⅠ～Ⅱ期结直肠癌患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄分层（分为≥60岁和＜60岁）、性别、肿瘤直径（分为≥5 cm和＜5 cm）和分化程度的结直肠癌患者之间K-ras基因突变率差异无统计学意义（P＞0.05）。PIK3CA基因突变率，低分化结直肠癌患者高于中高分化结直肠癌患者，TNMⅢ～Ⅳ期结直肠癌患者高于TNMⅠ～Ⅱ期结直肠癌患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄分层、性别、原发部位和肿瘤直径的结直肠癌患者之间PIK3CA基因突变率差异无统计学意义（P＞0.05）。EGFR基因阳性表达，TNMⅢ～Ⅳ期结直肠癌患者高于TNMⅠ～Ⅱ期结直肠癌患者，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同年龄分层、性别、原发部位、肿瘤直径和分化程度的结直肠癌患者之间EGFR基因表达差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。 表1 藏族结直肠癌患者K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达与临床病理特征的关系[n(%)] 2.3 K-ras、PIK3CA基因突变和EGFR基因表达的相关性 5例患者存在K-ras基因和PIK3CA基因共同突变。K-ras基因突变和PIK3CA基因突变之间存在正相关（r=0