mmp-12基因启动子区转录起点上游ag多态性与癌遗传关系的研究.docxVIP

mmp-12基因启动子区转录起点上游ag多态性与癌遗传关系的研究 0 mmp-12基因 基质金属酶（pmps）是一个由锌依赖性的铜水合酶家族。它能分解细胞的外部反应，调节细胞的粘附，维持肿瘤的微环境，在肿瘤浸润和转移过程中发挥重要作用。另一方面也可能通过调节细胞的增殖与凋亡、改变细胞的微环境及调节血管形成等参与肿瘤的发生过程。MMP-12是这个家族中的一员,又称巨噬细胞弹性蛋白酶或金属弹性蛋白酶,其底物是多种细胞外基质和非细胞外基质成分。MMP-12基因启动子区转录起始点上游82bp处存在单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP),体外实验表明此处的SNP可通过改变基因转录活性而影响该蛋白的表达,有关MMP-12 A-82G SNP与食管癌、贲门癌易感性关系的研究尚未见报道。 本研究应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism, PCR-RFLP)分析方法,探讨MMP-12 A-82G SNP对河北省食管癌、贲门癌高发区—磁县和涉县人群食管鳞状细胞癌、贲门腺癌的易感性的影响。 1 数据和方法 1.1 研究对象的选择 316名食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)患者、243名贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma, GCA)患者均来自河北省食管癌、贲门癌高发区磁县和涉县的癌前普查,609名健康对照为在相同地区和同一时间、通过癌前普查获得,所有研究对象均知情同意本项研究,由专门人员调查登记所有研究对象的性别、年龄、吸烟史及上消化道肿瘤家族史。将现吸烟或曾吸烟每天5支以上并持续两年或两年以上者定义为吸烟个体。将家族中有1名以上一级亲属和(或)2名以上二级亲属患有食管癌/贲门癌/胃癌者定义为上消化道肿瘤(upper gastrointestinal cancer, UGIC)家族史阳性。 1.2 枸杞酸钠抗凝 所有研究个体均采集外周静脉血5ml,经枸橼酸钠抗凝,4℃冰箱保存。并在采血后一周内以蛋白酶K消化-饱和氯化钠盐析法提取外周血白细胞DNA。 1.3 pcr和基因型分析 MMP-12 A-82G基因型检测应用PCR-RFLP方法进行。PCR反应体系为20 μl,其中模板DNA 100 ng,10×PCR缓冲液2 μl,染料2 μl,Taq DNA聚合酶(北京赛百盛生物有限公司)2.5 U,dNTPs 200 μM,上游引物(5′- GAGATAGTCAAGGG ATGATATCA -3′)和下游引物(5′-AAGAGCTCCAGAAG CAGTGG-3′)各200 nM,MgCl2(25 nM)1.2 μl。PCR反应条件为:94℃预变性10 min,然后94℃变性45 s、57℃退火45 s、72℃延伸45 s,35个循环后,72℃继续延伸7 min。PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳为199 bp,经限制性内切酶PvuⅡ(大连宝生物工程有限公司)37℃酶切16 h后,进行4%琼脂糖凝胶电泳分析基因型。A/G基因型存在PvuⅡ的识别位点,经酶切后表现为199 bp、175 bp和24 bp三条DNA片段,而A/A基因型缺乏PvuⅡ的识别位点仅有一个199 bp的片段,见图1。 为进行基因型检测的质量控制,每一批PCR反应均以灭菌双蒸水替代模板DNA作为阴性对照,并随机挑取10%DNA标本进行重复实验。 1.4 mmp-12基因型分布的模拟 用卡方检验比较基因型频率的观察值与预期值,并进行Hardy-Weinberg平衡分析。病例组和对照组的MMP-12基因型及等位基因型分布比较采用行×列表的卡方检验进行。应用非条件Logistic回归模型计算表示相对风险度的比值比(odds ratio,OR)及其95%可信区间(confidence interval,CI),以P0.05为差异有统计学意义。统计分析采用SPSS11.5软件包进行。 2 结果 2.1 ugic家族 ESCC患者组、GCA患者组与对照组之间性别、年龄构成相似(P0.05)。ESCC患者组、GCA患者组中吸烟个体比例与对照组相比差异无统计学意义(χ2=0.53和2.70,P=0.47和0.10)。ESCC患者组、GCA患者组中UGIC家族史阳性个体比例分别为49.4%、50.2%,显著高于对照组36.0%(χ2=15.51和14.68,P值均为0.00),表明UGIC家族史可能增加ESCC和GCA的发病风险(经性别和年龄校正后的OR=1.74和1.77, 95%CI=1.32～2.29和1.31～2.39)