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il-10基因启动子区单核苷酸多态性与高发区涉县人群食管鳞状细胞癌和贲门腺癌易感性的关系 [tumor，2006，26（2）：157-162]。 血管生成是恶性肿瘤发生和转移的一个基本过程。IL-10是一种重要的免疫抑制剂,由T淋巴细胞产生,可通过刺激血管生成因子基因表达来参与肿瘤血管生成,从而影响肿瘤的发生。IL-10基因位于染色体1q31-32,其启动子区-1082、-592等的多态性与IL-10表达有关。有报道表明,IL-10基因表达和食管鳞状细胞癌(ESCC)易感性呈正相关。但到目前为止,IL-10基因启动子区多态性与ESCC和贲门腺癌(GCA)易感性的关系尚未见报道。本研究通过病例对照方法研究了食管癌、贲门癌高发区涉县人群中IL-10基因启动子区多态性与ESCC和GCA易感性的关系。 1 材料和方法 1.1 病例选择及定义 本研究包括经组织学证实的ESCC患者203例和GCA患者152例,同时以443例健康个体作为对照。ESCC患者和GCA患者是2001～2003年间在涉县经内镜普查并经当地医院经组织学检查确诊的门诊或住院患者,健康对照组来自2001～2003年同一地区经内镜普查证实无上消化道肿瘤及癌前病变的无关个体。肿瘤患者及健康对照个体的性别、年龄、吸烟习惯及家族史的情况均在采血后由专人询问获得。吸烟个体定义为过去或目前吸烟≥5支/d,持续至少2年以上者。将有1名一级亲属或2名以上二级亲属患食管癌/贲门癌/胃癌的个体定义为具有上消化道肿瘤(upper gastrointestinal cancers,UGIC)家族史。仅有部分病例及对照组个体获得了吸烟情况和家族史资料。 1.2 蛋白酶k-氯化钠盐析法 抽取患者及对照个体的静脉血各5 mL(采血前均未用过放、化疗),以枸橼酸钠抗凝,采用Miller等的蛋白酶K-氯化钠盐析法提取白细胞DNA。 1.3 pcr扩增dntps后,选择2e,3 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法进行IL-10 G-1082A和C-592A基因型检测。扩增IL-10 G-1082A和C-592A两位点的上游引物序列为5′-CACTACTAAGGCTTCCTTGGGA-3′,下游引物序列分别为 5′-GTGAGCAAACTGAGGCACAGACAT-3′和5′-CCTAGGTCACAGTGACGTGG-3′,扩增片段分别为310 bp和748 bp。PCR反应体系为20 μL,其中模板DNA 100 ng,10 ×PCR buffer 2.0 μL,MgCl21.5 mmol/L,Taq-DNA聚合酶2 U,dNTPs 200 μmol/L和上、下游引物各200 nmol/L。阴性对照用蒸馏水代替模板DNA。IL-10 G-1082A位点反应条件为:94℃ 5 min预变性后,94℃变性30 s,60℃退火50 s,72℃延伸40 s,35个循环后,72℃继续延伸7 min。用10 UEcoN Ⅰ对PCR产物进行37℃酶切过夜。酶切产物用10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳分离,并用0.25%的硝酸银染色。A/A基因型为252 bp、39 bp和19 bp,G/G基因型为271 bp和39 bp,A/G基因型为271 bp、252 bp、39 bp和19 bp(图1)。IL-10 C-592A位点反应条件为:94℃ 5 min预变性后,94℃变性30 s,62℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环后,72℃继续延伸5 min。用10 URsaⅠ对PCR产物进行37℃酶切过夜。电泳及染色同上。酶切后产生240 bp、236 bp、222 bp、42 bp和8 bp 5个条带的为A/A型,产生476 bp、222 bp、42 bp和8 bp 4个条带的为C/C型,产生476 bp、240 bp、236 bp、222 bp、42 bp和8 bp 6个条带为A/C型(其中42 bp和8 bp已出胶,240 bp和236 bp由于相对分子质量接近,在凝胶中显示为一条带)(图2)。 1.4 非条件logistic回归分析 病例及对照组的SNP基因型及等位基因型分布比较采用χ2检验。应用非条件logistic回归模型统计经性别、年龄调整后的OR值和95%可信区间。统计分析应用SPSS 10.0软件包。采用EH软件计算病例及对照组IL-10的单体型频率。 2 结果 2.1 -年龄和性别校正的or值 ESCC、GCA患者组的性别、年龄分布与健康对照组相比无显著性差异(P0.05)。在健康对照组、ESCC患者组、GCA患者组中,吸烟者所占比例分别为33.2%、55.5%和66.7%,统计学分析显示,吸烟能显著增加ESCC和GCA的患病风险(经年龄和性别校正的OR值分别为1.88和2.