线虫神经系统的分离.docxVIP

线虫神经系统的分离 自1968年brenner首次倡导并开始分离以来，j.w首次将昆虫神经系统的三维重建与遗传分析和形态研究相结合。在分子、细胞和一般水平上，我们探索了昆虫神经系统的发展和功能，并取得了许多关于其他动物的重要成就。 1 两种神经元间的结构型 线虫神经系统结构很简单(Fig 3)。两性成虫只有302个神经元;雄成虫由于支配尾交配器的需要,增加到381个神经元。这些神经元从形态上可分为118结构型。利用激光微束选择杀死一个或一组神经元可确定该神经元对整体行为的影响,从而鉴别其功能。用这一技术可把118神经元结构型在功能上分为40种类型。从形态上可鉴别的化学突触的数目有5000个,间隙连接有600个,神经肌肉接头有600个。 2 细胞编程死亡 线虫是细胞定数动物。发育过程中产生的体细胞总数有1090个,其中131个细胞注定要按一定的发育程序陆续死亡。遗传分析发现细胞编程死亡是受两类基因控制的,ced-3和ced-4促进死亡,而ced-9则抑制死亡: 从线虫基因序列出发,不久便找到了高等动物控制细胞编程死亡的同源基因,并深入研究了控制编程死亡的信号传递途径。 现在已经知道动物体内细胞编程死亡是受其他细胞的信号控制的。生长中的神经纤维依赖靶细胞产生的营养因子(如NGF等)存活,它们通过对稀少的营养因子的竞争而自动调节存活的神经元的数目。细胞编程死亡在神经系统的形态发生、大脑皮质新旧构造的更替、神经通路的建立以及神经系统退行性疾病的发病机制中均起重要作用。目前这方面的研究受到很大重视,正方兴未艾。 3 egl-5基因突变 线虫神经母细胞的决定和迁移受HX-C基因群的lin-39,mab-5,egl-5基因控制。Fig 4a示lin-39(右斜线),mab-5(垂直线),egl-5(左斜线)基因突变影响的区域。当lin-39突变时,处于其影响区域的神经母细胞的发育命运改变为P1P1P1P1P1P9P9;mab-5突变时,处于其影响区域内的细胞改变为P6P6P2P2P2;egl-5突变时则P12改变为P11。 mab-5基因不仅决定身体后段神经母细胞的发育命运,而且还影响通过此区域的细胞的迁移行为。当QL迁移到后区,启动细胞内mab-5表达,并控制该细胞的子细胞的迁移行为。当mab-5基因突变或表达异常时,QR衍生的子细胞的迁移方向从向前折到向后;而QL衍生的子细胞,则从向后折为向前(Fig 4b)。 线虫的5种运动神经元(VA,VB,VC,AS和VD)起源于10个前体细胞(腹神经索神经母细胞),其中每一个母细胞按相同谱系图式进行分裂,结果产生的神经元,按各自在前后轴上的不同位置而有不同的基因表达图式,从而决定了不同的分化类型。神经元的分化命运一方面受到lin-39和mab-5区域表达影响,另一方面还受到影响细胞谱系进行的unc-59和unc-85的影响。这些基因突变使有关细胞谱系的分裂受阻,结果不能产生原来应有的全部成熟神经元。一些细胞如处于适当位置可分化为VB或VC细胞,如位于其他位置则发生凋亡(Fig 5)。 成熟运动神经元的功能是受特定的基因表达图式规定的(Fig 5)。细胞的各种基因表达图式可以用RNA原位杂交、荧光标记抗体等方法方便地显示出来。新近出现的绿荧光蛋白标记技术还可以在活体上追踪靶基因产物的动向。 4 神经元/gaba基因 线虫神经元的结构简单,只有一个或两个不分叉的突起,形成或接受突触连结,但其基本功能与其他动物相似,具有主要的神经递质(乙酰胆碱、五羟色胺、多巴胺、谷氨酰胺等),甚至具有在药理学上相似的受体。神经元细胞核透明可见,突触连接网络图式已清楚,便于用激光微束选择性地杀死细胞。突变分析已发现影响行为的基因约有250个。因此,可以结合遗传分析和细胞损伤来研究线虫的行为。 线虫嗅觉反应行为已作过精细的研究,对已测试过的121种挥发性化合物,大约半数有反应。已知影响嗅觉的基因大约20个,其中一些基因的突变能专一地引起特定嗅神经元的形态变异和嗅功能缺损。 如odr-1、odr-2、odr-5、daf-11、daf-21基因突变造成对苯甲醛和异戊醇的反应受损,而对其他气味感受无影响。这一现象与用激光微束杀死AWC神经元的结果相同,因而提示这些基因与AWC神经元的功能有关。其他基因突变则引起对相应气味感受的缺损。神经元嗅觉反应的信号分子涉及cAMP,IP3。cAMP依赖通道基因突变,一些嗅觉反应便消失。 线虫的排粪过程涉及三组肌肉群在时空上协调的一连串动作。遗传分析表明排粪运动程序是受12个基因控制的,其中任一基因突变可去除其中相应的步骤,但不影响其他动作的进行。如nuc-16突变影响aBoc肌肉群(身体前段肌肉群)动作,而pBoc(身体后段)和Exp(肠收缩)动作不受影响。其他基因突变则影响其他两肌肉群