蛋白质组学研究技术.pptx

;;;;;;;;;;;;;;荧光染色细胞内蛋白质;;;主要研究内容 ;;Central dogma;;;;;10/10/2023;;;;;　蛋白质组研究技术路线流程图;10/10/2023;蛋白质组学试验室所需条件;;;10/10/2023;;;2D-SDS反复性;;;;;;;;10/10/2023;;;10/10/2023;;;;;10/10/2023;10/10/2023;10/10/2023;Ettan Dalt twelve电泳系统;Ettan Dalt six电泳系统;;10/10/2023;也许原因：样品含高丰度Pr;也许原因：Tris质量不好;;;Image Scanner;全自动斑点切取系统（Ettan Spot Picker） ;;;;;;10/10/2023;;;;10/10/2023;;进样系统;;;;;;;;;10/10/2023;;10/10/2023;;;;;;;;;;;; 这样就形成了一系列准分子离子QM+而出现(M+1)+，(M-1)+，(M+17)+，(M+29)+等质谱峰;;（3） 场电离源 (FI);;;;;;;;;;10/10/2023;;特点：APCI主要产生是单电荷离子，所分析化合物相对分子量一般不大于1000;;;;;10/10/2023;;;;;;能量相同，方向不一样离子半径相同;;;10/10/2023;;;;;10/10/2023;;;10/10/2023;;;;10/10/2023;;;;;;10/10/2023;;;;;;10/10/2023;质谱表;;;10/10/2023;;;;;;同位素离子峰（M+1峰）;;;正已烷裂解后产生离子碎片;同位素离子峰（M+1峰）;亚稳离子：从离子源出口达到检测器之前产生并统计下来离子称亚稳离子。离子从离子源达到检测器所需时间约10-5秒(随仪器及试验条件而变)，寿命大于10-5秒稳定离子足以达到检测器，而寿命不大于10-5秒离子也许裂解(M1+ ? M2+ +中性碎片)。在质量分析器之前裂解产生M2+因其动能不大于离子源生成M2+，在磁分析器中偏转不一样，以低强度、于表观质量m*(跨2—3个质量单位)处被统计下来，其m／z一般不为整数。m*与m1、m2(分别为M1，M2离子质量)之间关系为：m* = m 22/ m1;③质荷比一般不是整数(m* m2+)。; 经计算：;电离室;分子离子峰判断，由于在质谱中最高质荷比离子峰不一定是分子离子峰，这是由于存在同位素和分子离子反应等原因，也许出现M+1或M+2峰；另一方面，若分子离子不稳定，有时甚至不出现分子离子峰。;在判断分子离子峰时可参照下列几个方面规律和经验办法：;有机化合物分子离子峰稳定性次序：;;分子离子峰与邻近峰质量差是否合理。如有不合理碎片峰，就不是分子离子峰。例如分子离子不也许裂解出两个以上氢原子和不大于一种甲基基团，故分子离子峰左面，不也许出现比分子离子质量小3-14个质量单位峰；若出现??量差15或18，这是由于裂解出-CH3或一分子水，因此这些质量差都是合理。;分子离子峰识别; M-1峰：有些化合物由于其分子离子不稳定，只能出现M-1峰，而无分子离子峰。M-1峰不符合氮律，容易区分。腈类化合物易出现此种峰，但有时也有分子离子峰，强度不大于M-1峰。 ;分子量测定 ;分子式确定 ;10/10/2023; 在低辨别质谱仪上，则能够通过同位素相对丰度法推导其化学式，同位素离子峰相对强度与其中各元素天然丰度及存在个数成正比，对于一种CwHxNyOz化合物，其同位素离子峰(M+l)+、(M＋2)+与分子离子峰M+强度之比为 ; 忽视2H,17O影响，则上述二式略为; 利用精确测定(M+1)+，(M+2)+相对于M+强度比值，可从Beynon表中查出最也许化学式，再结合其他规则，确定化学式。 ;;;;;10/10/2023;;; 可分为均裂、异裂及半均裂三种。 ; ⑵异裂或称非均裂(heterolytic cleavage)：断键后两个成键电子所有转移到一种碎片上。 ; ⑶半均裂(hemi-homolysis cleavage)：离子化键断裂过程，称为半均裂。 ; 2、重排(rearragement)：通过断裂两个或两个以上键，构造重新排列形成离子裂解。;具有不饱和中心(双键或叁键)，易发生在醛、酮、酰胺、烯烃、烷基苯、芳基烷基醚、腈或环氧化合物( )。 ;⑵逆Diels-Alder重排(RDA重排)： ; 分子式测定 ;;