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蜂王人工授精试验初报 蜜蜂是高度社会化的昆虫，具有重要的经济和生态价值。近年来,随着人口、资源和环境问题的日益突出,世界各国尤其是发达国家都在探寻新的对策和措施,寻找增产途径。实践证明,利用各种育种新技术培养优良品种是诸多增产因素中最为直接、经济、有效的措施。航天育种是最近几年快速发展起来的一种新技术,它利用卫星、飞船或高空气球等返回式航天器将植物种子、动物胚胎、组织或细胞、微生物等带到宇宙空间,在强辐射、微重力、高真空、交变磁场等太空诱变因子的作用下,使搭载物发生性状的可遗传变异,返回地面后再经人工选育、扩大,在较短的时间内培育出高产、优质的生物新品种或新品系。在创造罕见突变基因资源方面,航天育种已发挥出重要的作用,并显示出良好的产业发展态势。从2005年起,中国农业科学院蜜蜂研究所在国际上首次进行了蜜蜂航天育种的尝试,旨在利用太空技术来创造蜜蜂优良的品种或有益性状。本文报道了搭载后3年地面试验所取得的初步进展。 1 材料和方法 1.1 理水液 供试蜜蜂精液取自中国农业科学院蜜蜂研究所保种用的意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)和卡尼鄂拉蜜蜂(Apis mellifera canica,简称卡蜂)的雄蜂,参考Kaftanalglu Peng的方法配制精液稀释液及其保护液。SP1代及其对照组进行人工授精所需的处女蜂王,均用意蜂或卡蜂同一个纯度较高的母本蜂群的幼虫培育。 1.2 方法 1.2.1 蜂种和精的采集 选择纯度较高的意蜂和卡蜂各一群作为父本蜂群,加入雄蜂脾,奖励饲喂,促使蜂王产未受精卵;待雄蜂出房后,采用白色和红色的指甲油分别对这两种雄蜂的胸部进行标记;12~18d后,在巢门口分别捉取有标记的雄蜂,带回实验室进行精液的采集。两个蜂种各采集400μl精液,可供后期50只处女王人工授精使用。 将每个蜂种的400μl精液平均分装在5个0.2ml的PCR管中,分别加入80μl的精液保存缓冲液,盖上盖子混匀并用封口膜封口;将这5个PCR管嵌套在1个1.5ml Eppendorf管中,往Eppendorf管中加入精液保护液,盖上盖子后用封口膜封口,并用黑色Mark笔将管壁全部涂黑,贴上标签(蜂种及取精日期),再用锡箔纸包裹后避光常温保存。每个蜂种各保留2管精液在地面保存以作对照,其余的3管装入45ml的塑料螺口离心管中作航天搭载处理。 1.2.2 雄蜂香精的测定 利用第21颗返回式科学与技术试验卫星和“实践8号”育种卫星(我国第一颗专用育种卫星)搭载保存的雄蜂精液。前者于2005年8月2日升空,太空航行27d;后者于2006年9月9日升空,在轨运行15d,近地高度为180km,远地高度为469km,轨道倾角为63°,回收舱内温度20.72℃~7.21℃。 1.3 测量和观察 1.3.1 服装与活力 用生理液将精液稀释20倍,在400倍显微镜下观测。精子活力指在100 条精子中,能够做直线或圆周运动的精子百分率。 1.3.2 蜂群的授精 卫星返回地面前25d开始移虫,分别培育50只意蜂和卡蜂的处女王(处理组30只,对照组20只);利用搭载的意蜂及卡蜂的精液并采用♀(意)×♂(意)、♀(意)×♂(卡)、♀(卡)×♂(卡)三种组配方式进行人工授精,后续观察发现仅♀(意)×♂(卡)这一组合中有一只蜂王产卵正常,即为SP1代蜂王;授精后蜂王被剪翅并贴上背标,放回原群饲养;所有的蜂群都采用相同的饲养管理方法,并在巢门口安装防护装置以防止蜂王飞出去自然交尾;1周后记录处理组及对照组的蜂王死亡率。 1.3.3 sp2、sp3代蜂王的诱导诱导工蜂的发育 用航天搭载的精液对处女王进行人工授精,得到SP1代蜂王。因为SP1代蜂王孤雌生殖所产的未受精卵未受太空辐射,所以无育种价值;但是用SP1代蜂王产的受精卵培育出的子代处女王,经过CO2处理促其产下的雄蜂具有育种价值。待雄蜂成熟后,采集其精液,进行人工授精(兄妹交配),得到SP2代蜂王;利用SP2代蜂王培育的子代雄蜂与子代处女王,再经过人工授精,产下的即为SP3代蜂王。 观察各代蜂王后代工蜂的形态学变化,若发现形态或其他变异,立即与地面对照及海南中蜂进行比较。在我国各地野生蜂中,海南中蜂个体居小。并以该群为母本,大量移虫培育蜂王,并记录变异工蜂的比例。 2 结果与分析 2.1 两组精子的存活率 如表1所示,2005年和2006年2次搭载的精液精子活力分别为41.4%和18.6%,对照组精液的精子存活率分别为84.5%和91.7%;与对照组相比,航天搭载后存活的精子不活跃;人工授精后,蜂王1周内死亡率分别为50.0%和78.9%,对照组的死亡率分别为24.8%和22.4%。 2.2 红蜂王的诱导发育 在2005年的搭载试验中,利用SP1代成活蜂王所产卵发育而成的幼虫培