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海金沙提取物对大鼠肾草酸钙结晶形成的影响 尿滴注是排尿的第三常见疾病，包括肾、冠状动脉粥样硬化、膀胱和尿失禁。其中，gartenstral的发病率最高。80%泌尿系结石由草酸钙组成。随着生活水平的提高, 肾结石的发病率逐年升高。据报道, 目前世界上5%的人口正在承受着肾结石带来的病痛。肾结石治疗多采用放射或手术干预, 如体外冲击波碎石、输尿管镜、超声碎石、钬激光碎石等。但手术治疗具有价格昂贵、复发率高、肾损伤等缺点。中药预防治疗肾结石有着悠久的历史和良好的效果, 且具有无创伤、不良反应少等优点。中药海金沙[Lygodium japonicum(Thunb.) sw.]是蕨类植物海金沙科海金沙属一年生草质藤本植物, 广泛分布于广东、广西等地。海金沙可全草入药, 味甘淡, 性寒, 富含糖、酚和黄酮类化合物, 临床用于治疗尿路感染、尿路结石、肾炎、水肿, 具有清热解毒、利尿除湿之功效。目前笔者尚未见国内外有海金沙治疗尿路结石的基础研究的相关报道, 故在本实验中采用水提醇沉法, 从海金沙中提取活性成分, 研究海金沙提取物对大鼠肾草酸钙结石的影响, 并探讨其相关作用机制, 为海金沙的开发利用提供理论依据。 1 试剂与仪器方法 Wistar 大鼠, 雄性, 体质量150～200 g, 由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供 (动物合格证号 。 海金沙全草 (购自广州清平药材批发市场, 经华中科技大学同济医学院药学院生药学教研室鉴定) , 乙二醇 (天津市广成化学试剂有限公司, 批号 , 氯化铵 (天津市北方天医化学试剂厂, 批号 , 结石通 (成分:广金钱草, 玉米须, 石韦, 鸡骨草, 海金沙草, 车前草, 茯苓, 白茅根, 广西梧州制药股份有限公司, 批准文号:国药准字 批号 。钙 (Ca) 、镁 (Mg) 、磷 (P) 、尿酸 (uric acid, UA) 、血尿素氮 (blood urea nitrogen, BUN) 、肌酐 (creatinine, Cr) 试剂盒 (中生北控生物科技股份有限公司, 批号分别为100371, 100221, 100171, 100581, 100721, 101881) , 草酸酶联免疫吸附剂测定 (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 试剂盒 (美国RD公司, 批号:100421) , 超氧化物歧化酶 (superoxide dismutase, SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶 (glutathione peroxidase, GSH-Px) 试剂盒 (南京建成生物工程研究所, 批号分别 。 显微镜 (日本Olympus公司) , SPX型智能生化培养箱 (宁波东南仪器有限公司制造) , ES-C600型电子天平 (湘仪天平仪器厂) , AVE-853型半自动生化分析仪 (长沙高新技术产业开发区爱威科技实业有限公司) , MK3酶联免疫检测仪 (芬兰Thermo公司) , Z323K型低温高速离心机 (法国Hermle公司) 。 海金沙全草粉碎, 称取100 g, 置于500 mL圆底烧瓶, 加入纯化水400 mL回流提取4次, 每次2 h, 合并提取液并浓缩。浓缩后加入95%乙醇沉淀, 使乙醇含量达到80%, 静置抽滤, 室温干燥滤液得到总膏, 提取率约2%。 雄性Wistar大鼠60只, 饲养于清洁级动物实验中心, 自由饮水和进食, 光照与黑暗各12 h交替, 室温 (22～25) ℃ , 相对湿度50%～60%。将大鼠随机分为空白对照组、模型对照组、结石通组 (阳性对照组) 、海金沙低剂量组、海金沙中剂量组和海金沙高剂量组, 每组10只, 各组间平均体质量比较均差异无统计学意义 (均P0.05) 。适应性喂养1周后, 空白对照组每日以纯化水1.5 mL灌胃, 其余各组每日以成石液 (1.25%乙二醇+1%氯化铵) 1.5 mL灌胃造模, 连续4周。造模时, 各组按下述剂量灌胃给药:结石通组给予结石通5 g·kg-1;海金沙低、中、高剂量组分别给予海金沙提取物50, 100, 150 mg·kg-1, 空白对照组和模型对照组给予等体积纯化水, 连续灌胃4周。 实验结束前1 d用代谢笼分别收集各大鼠24 h空腹尿液, 测定24 h排尿量, 采用半自动生化分析仪测定24 h尿Ca、Mg、P、UA含量。末次给药1 h后, 处死动物, 下腔静脉穿刺取血1 mL, 离心取上层血清, 采用半自动生化分析仪测定血清Cr、BUN含量。处死大鼠后取两侧肾脏。每只大鼠取左肾用10%甲醛溶液固定, 用于肾组织病理学检测;右